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lovestrings

金虫 (小有名气)

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[求助] 扫描电镜样品前处理

小女子做的是弧菌的电镜实验，曾经做过一次，按照下面的步骤做的，但是效果不好，细菌拍下来不立体。

将菌液以3000r /min转速离心10min后，弃上清液。注入 2.5%戊二醛，静置2h以上固定。固定后离心，将细菌沉积，弃上清，以蒸馏水重悬浮，重复3次，最后以蒸馏水重悬。分别用30%、50 %、70 %、80%、90%梯度浓度酒精脱水，每个梯度中静置 10min，脱水完毕，用纯酒精脱水 3次，每次30min，然后用纯叔丁醇置换酒精3次, 每次30min，最后吸取混匀的细菌-叔丁醇悬浮液滴在覆有盖玻片的样品台上，置冷冻干燥机内真空干燥。

有一些不明白的地方是：酒精梯度干燥的时候，静置10分钟后，是不是需要离心，然后弃上清，再加下一个梯度的酒精干燥？这个地方一直想不通，如果不离心的话，酒精中的水分不是一直都无法散去吗？

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1楼 2012-09-03 09:44:24

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哈皮果果

金虫 (小有名气)

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专业: 植物病理学

引用回帖:

3楼: Originally posted by 416114799 at 2012-09-03 20:18:12
按以下步骤制备扫描电镜样品： 2.5%戊二醛固定 4 h→磷酸缓冲液洗涤 3 次→乙醇梯度脱水（分别为 30%、50%、70%、85%、90%乙醇各 1 次，100%乙醇 2 次，15 min/次）→
乙酸异戊酯置换乙醇 2 次（20 min/次），每一 ...

你好，我想问下，用于固定的戊二醛是用磷酸盐缓冲液来配制，那么用于脱水的乙醇梯度需要用缓冲液来配制吗？非常感谢