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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+6, MicEPI+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-09-03 20:47:20
lovestrings: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 实在感谢了~~ 2012-09-04 15:44:39
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2015-04-01 16:44:25
按以下步骤制备扫描电镜样品: 2.5%戊二醛固定 4 h→磷酸缓冲液洗涤 3 次→乙醇梯度脱水(分别为 30%、50%、70%、85%、90%乙醇各 1 次,100%乙醇 2 次,15 min/次)→
乙酸异戊酯置换乙醇 2 次(20 min/次),每一步完成后经 8000 r/min 离心 5 min。将样品分别在 20℃、40℃和80℃冷冻 12 h,于冷冻干燥仪中干燥 12 h,备用。

我是这么做的。根据你的描述,有以下问题:①戊二醛固定时间不够;②洗涤液不能用水,必须用磷酸缓冲液PBS(1/15 mol/L,pH=7.2;配方:Na2HPO4*12H2O取23.876g+KH2PO4取9.078g,分别溶于1 L水中,然后将二者按照7:3的体积比混合(V:V),就可以了。);③不知道你的戊二醛是怎么配的?戊二醛应该用以上的PBS来配置;④酒精梯度脱水,顾名思义就是要把水自由水除去,但是如果不按梯度,突然用100%来脱水是不行的,因为浓度太高,细胞形态就严重变形;按照我的这个梯度,我做出来非常漂亮;⑤ 在冷冻干燥前,必须把脱去自由水的样品按照从-20→-40→-80的梯度冷冻,目的把结合水固定住,梯度原理与④相同;⑥ 乙酸异戊酯的目的是置换掉乙醇,该药品神经毒,请在通风橱进行,不过只是有机物而已,偶尔接触没关系,不用怕。凡药品都有毒的。无法附图片,不然给你看看我拍的。希望对你有帮助。

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做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
3楼2012-09-03 20:18:12
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