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lovestrings

金虫 (小有名气)

[求助] 扫描电镜样品前处理

小女子做的是弧菌的电镜实验,曾经做过一次,按照下面的步骤做的,但是效果不好,细菌拍下来不立体。

将菌液以3000r /min转速离心10min后,弃上清液。注入 2.5%戊二醛,静置2h以上固定。固定后离心,将细菌沉积,弃上清,以蒸馏水重悬浮,重复3次,最后以蒸馏水重悬。分别用30%、50 %、70 %、80%、90%梯度浓度酒精脱水,每个梯度中静置 10min,脱水完毕,用纯酒精脱水 3次,每次30min,然后用纯叔丁醇置换酒精3次, 每次30min,最后吸取混匀的细菌-叔丁醇悬浮液滴在覆有盖玻片的样品台上,置冷冻干燥机内真空干燥。

有一些不明白的地方是:酒精梯度干燥的时候,静置10分钟后,是不是需要离心,然后弃上清,再加下一个梯度的酒精干燥?这个地方一直想不通,如果不离心的话,酒精中的水分不是一直都无法散去吗?
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lovestrings

金虫 (小有名气)

自己顶起来
2楼2012-09-03 16:22:04
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lovestrings

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 416114799 at 2012-09-03 20:18:12
按以下步骤制备扫描电镜样品: 2.5%戊二醛固定 4 h→磷酸缓冲液洗涤 3 次→乙醇梯度脱水(分别为 30%、50%、70%、85%、90%乙醇各 1 次,100%乙醇 2 次,15 min/次)→
乙酸异戊酯置换乙醇 2 次(20 min/次),每一 ...

前辈,我的细菌样品如果处理好,4天后才能拍电镜的照片,会不会影响结果?如果不影响,我是放在-80℃里保存4天呢,还是放在-20℃呢?谢谢啦
6楼2012-09-06 13:37:47
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lovestrings

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 416114799 at 2012-09-06 14:01:22
处理好了就是冷冻干燥了,这才叫处理好。如果还没条件冷冻干燥那就可以现在-80放着,要冷冻干燥了再拿去干燥。如果你是冷冻干燥后,要保存,只能放在有干燥剂的地方,如果你这个也不知道就没法指导了。好像你很多都 ...

我只不过想早点把样品处理好,我们学校里的电镜实验做起来要排队,我怕样品处理好了,不能保存,细菌会变形。你的意思就是不能马上做电镜实验,就先-80度冻起来,要拍电镜照片之前的12小时去冷冻干燥,省的干燥完了不能马上做实验,又吸潮了呗
9楼2012-09-06 15:38:08
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