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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助：双歧杆菌的培养方法！
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tianjietian

木虫 (小有名气)

[求助] 求助：双歧杆菌的培养方法！

实验室要扩项，做双歧杆菌的计数，以前没有做过类似的实验，只知道双歧杆菌是专性厌氧菌，想请教各位大拿，这个菌种的培养条件是什么?最好是从菌种传代的培养基温度等等条件到计数观察菌落特征都能详细提供一下！谢谢！着急！！
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1楼2012-09-02 17:05:30
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with_nothing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tianjietian: 金币+20, 非常感谢！ 2012-09-06 21:53:06
zhang8826857: 金币+5, MicEPI+1, good，epi一枚。 2012-09-09 23:00:35
我们养过，给你作参考：双歧杆菌，培养基PTYG，TPY，MRS等。37度培养。要创造厌氧环境才能培养，我们采用厌氧箱法。液体培养条件要求稍微低一点，可用圆底烧瓶（口比较细，容量还大），塞上棉塞在普通培养箱中也可以生长，但平板几乎不行，可以试试双层平板法，如果不长，那就要必须创造严格的厌氧环境了。
计数时常采用倾注平板法，具体实验方法在实验书上都有。菌体会在培养基表面和中间都生长，长在表面和底部的是圆形，长在培养基中间的是菱形。
双歧杆菌保藏可采用甘油管法，配60%的甘油溶液，与发酵液1:3混合，用EP管保藏于-80度冰箱即可，双歧杆菌的平板在4度下死亡较快，两天以后就够呛能接出来了。
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小崔9333
江水
2楼2012-09-03 16:38:12
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with_nothing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们用的不是PYG,是PTYG，TPY。我们复苏的时候就用的这些。买菌时候的说明，按照说明培养一般都没问题的啊。
双层平板就是，在凝固的刚接菌的平板上面再倒一层，菌只在下面的那层，不过有些麻烦，我们也不常用，有厌氧箱就够用了。另外书上也提到过厌氧菌可采用试管穿刺接种，也可以试一试。
你们用的是厌氧箱吗？怎么创造厌氧环境的？
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江水
4楼2012-09-05 17:26:19
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with_nothing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tianjietian at 2012-09-06 21:52:48
我我们的设备很简陋，就是一个厌氧盒子像保鲜盒一样的，把培养物放进去，里面加上厌氧发生剂（一种撕开口就能创造厌氧环境的袋子）再密封上就行了，不知道这样可不可以。不过我昨天看了我用新买的菌传的斜面好像长 ...

方法可以的。只要无氧气就行。还有一个问题，咱们操作的时候都是在空气中操作的，要尽量快，及时放进去，不要超过15分钟为好
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江水
6楼2012-09-07 13:28:34
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with_nothing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tianjietian at 2012-09-09 21:49:15
您好！还有问题想要请教您。今天看了培养的双歧杆菌，在莫匹罗星锂盐MRS培养基中涂布的，一个菌也没有长，不知道为什么？斜面都长了，菌悬液也浑浊了，怎么平板不长啊？是不是BBL上上好一些？还有是不是涂布的方法 ...

这个现象就有点奇怪了，是不是密封性不好了，斜面都长了。双层平板你可以试一试看，在涂布好的平板上倒一层固体培养基，不要太烫，也要放在厌氧环境中培养。涂布的浓度别太稀了。（也可以直接用倾注法，等培养基凝后，再倒一层。）
还有，斜面的培养基也有莫匹罗星锂盐吗？我随便搜了一下《莫匹罗星锂盐改良MRS检测双歧杆菌的应用研究》中讲到，并不是所有双歧杆菌都耐这个盐，而且盐的浓度也有很大。
我觉得莫匹罗星..可以不加，反正就这一种菌，不用抑制其他菌
培养基，方法，一批实验多试几种吧，现在不是挺着急的嘛。
接种时要选择新鲜活跃的菌液或者刚长好的新鲜的单菌落
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江水
8楼2012-09-10 10:58:46
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with_nothing

金虫 (正式写手)
应用研究》中讲到，并不是所有双歧杆菌都耐这个盐，而且盐的浓度也有很大影响。
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江水
9楼2012-09-10 11:00:59
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henshui005

新虫 (初入文坛)
GB4789.35中提到双歧杆菌的平板计数用到的是BBL
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12楼2013-07-11 13:55:09
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tianjietian

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by with_nothing at 2012-09-03 16:38:12
我们养过，给你作参考：双歧杆菌，培养基PTYG，TPY，MRS等。37度培养。要创造厌氧环境才能培养，我们采用厌氧箱法。液体培养条件要求稍微低一点，可用圆底烧瓶（口比较细，容量还大），塞上棉塞在普通培养箱中也可以 ...

谢谢指导！那么冻干菌株在复活的时候用什么培养基？PYG、营养肉汤还是其他的？我在CICC购买的阳性菌株，使用说明上用强化梭菌培养基培养双歧杆菌，不知道能不能培养出来？还有我们实验室目前没买到PYG的添加试剂（氯化红霉素和维生素K1），只有液体培养基，不知道不加的话菌能否生长？厌氧条件也都用了，就是平板划线不长，您说的双层平板法是否接完之后再铺一层培养基啊？昨天刚把新买到的双歧传了肉汤和斜面，36度厌氧培养了，不知道结果如何，还请继续指教！！
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3楼2012-09-04 12:12:55
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tianjietian

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by with_nothing at 2012-09-05 17:26:19
我们用的不是PYG,是PTYG，TPY。我们复苏的时候就用的这些。买菌时候的说明，按照说明培养一般都没问题的啊。
双层平板就是，在凝固的刚接菌的平板上面再倒一层，菌只在下面的那层，不过有些麻烦，我们也不常用，有 ...

我我们的设备很简陋，就是一个厌氧盒子像保鲜盒一样的，把培养物放进去，里面加上厌氧发生剂（一种撕开口就能创造厌氧环境的袋子）再密封上就行了，不知道这样可不可以。不过我昨天看了我用新买的菌传的斜面好像长了，就是太少了不知道能不能再传下一代了，不行就用它试试了。非常感谢您的指导，有问题还需要您的进一步帮助！谢谢!
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5楼2012-09-06 21:52:48
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tianjietian

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by with_nothing at 2012-09-07 13:28:34
方法可以的。只要无氧气就行。还有一个问题，咱们操作的时候都是在空气中操作的，要尽量快，及时放进去，不要超过15分钟为好...

您好！还有问题想要请教您。今天看了培养的双歧杆菌，在莫匹罗星锂盐MRS培养基中涂布的，一个菌也没有长，不知道为什么？斜面都长了，菌悬液也浑浊了，怎么平板不长啊？是不是BBL上上好一些？还有是不是涂布的方法不好？应该想您说的做双层更能创造厌氧环境啊？很着急这个菌从来没做过，真是不太好做啊。要是做不出来就通不过扩项了。请指教！
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7楼2012-09-09 21:49:15
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tianjietian

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by with_nothing at 2012-09-10 10:58:46
这个现象就有点奇怪了，是不是密封性不好了，斜面都长了。双层平板你可以试一试看，在涂布好的平板上倒一层固体培养基，不要太烫，也要放在厌氧环境中培养。涂布的浓度别太稀了。（也可以直接用倾注法，等培养基凝 ...

谢谢！就是有些奇怪，今天又看了一眼，BBL培养基的双碟上长双歧杆菌了，不过就是长得不好，蔓延成层了，不好计数；莫匹罗星MRS上没有长，可能是这个培养基不太适合菌的生长吧。还有菌浓度高了出现培养基琼脂液化的现象不知道为什么？就是培养基好像被菌吞噬了一部分，凹陷进去一块，真是奇怪了。唉，实验的问题就是多！
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10楼2012-09-11 21:54:55
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