10楼: Originally posted by xiongyaoling at 2012-08-31 09:05:47
首先得确定你的目的条带连上了吗？菌落PCR没有结果，可能是酶切和连接上出上问题。扩增得到200bp，这应该是引物二聚体吧。

9楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-31 06:53:28
如果分子量都不对，那我觉得是从最开始找问题应该，每一步都CHECK一下。
PCR之后，跑胶，请加MARKER标定PCR产物分子量。
回收之后，请把回收产物用2-3微升跑胶，看分子量是否正确。
如果正确，连接转化。
转化后 ...

3楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-08-30 10:14:59
PCR很可能扩增得到有条带的假阳性克隆，你P的同时最好做个酶切验证，验证结果一致的再测序，这样是你需要的东东的可能性就更大！

2楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-30 09:58:02
会不会你挑的菌是假阳性的呀，多挑几个试试，或酶切看看

5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-30 13:12:12
如果你测序后获得800bp，但是比对没有同源性序列，说明是一个新序列。
如果测序结果只有200，只能说明你连接上的片段不对，或者是假阳性。最好，菌落PCR验证时，用通用引物和你自己的特异引物同时扩增来验证。