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hzxm0316

铁虫 (初入文坛)

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专业: 植物进化生物学

[求助] 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带

PCR时得到目的片段800bp，亮且单一，可是连接转化后，再菌液PCR鉴定，却始终只有200bp左右的条带，是怎么回事啊？有两次菌液鉴定得到800bp的单一亮条带，可是将测序结果提交到NCBI比对，却是没有找到相似序列？为什么就是转化不出目的序列呢？哪位大侠路过，请帮忙解答，谢谢！

（载体为PUCm-T Vecter；宿主为E.coli 5a）
（菌液鉴定：M13通用引物）
实验均按照生工生物T-载体PCR产物克隆试剂盒上规定操作

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1楼 2012-08-29 16:56:32

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hzxm0316

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-31 06:53:28
如果分子量都不对，那我觉得是从最开始找问题应该，每一步都CHECK一下。
PCR之后，跑胶，请加MARKER标定PCR产物分子量。
回收之后，请把回收产物用2-3微升跑胶，看分子量是否正确。
如果正确，连接转化。
转化后 ...

谢谢，你的实验态度很谨慎，值得学习！可是我觉得不是分子量的问题，最后得到的200bp可能是引物二聚体，也就是说目的片段丢失，没有克隆出来