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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

[求助] 线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序 已有1人参与

各位虫友好！
我是做鱼类线粒体基因的，提，问题如题：线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序？希望大家多交流，谢谢！
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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
1楼 2012-08-27 09:22:08
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stoni

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

与酶、PCR反应有关。在重复序列区，PCR过程中容易造成滑链，导致扩增产物长度不一，PCR产物最后实际是长度不等的混合物。如果直接测序，会出现重叠峰。如果克隆测序，则是单一片段，测序为单峰。
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13楼2014-12-20 16:00:56
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序当然要纯的底物才行。你的样品有不同的序列混在一起，怎么能够将各自的序列分别区别开？
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2楼2012-08-27 11:49:10
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR 过程中会产生一些非特异的产物，需要再次克隆将其筛除，尽管如此，你的测序产物也不可避免的含有你不想要的东东！！
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-08-27 12:30:55
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我个人觉得这个重复序列是你测序不准的原因，让公司在此区域设计测序引物进行双向测序，然后拼接，看看结果如何。
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生物化学与分子生物学
4楼2012-08-28 11:50:18
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