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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取质粒
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qianhaobei

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取质粒

关于质粒的提取：我小提用的是天根小题中量质粒试剂盒，大提用的是无内毒素质粒大提试剂盒，提的是大肠杆菌，已经三个星期了，还没成功！小提后PCR，质粒在对照片段的条带有点虚，大提后PCR，琼脂糖凝胶电泳分析，在对照片段下面和上面有条带，应该是引物二聚体和模板吧，同样的条件下，原来的质粒条带清晰明亮，可我提的质粒PCR就是扩不出来，但测定浓度是498ng/μl。我的质粒大小是15150bp，扩增片段是438bp。请虫友们指点……感激不尽！
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加油……
1楼 2012-08-24 18:25:35
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qianhaobei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zy晨曦 at 2012-11-03 08:50:27
电泳图片中的三条带怎样才算质粒提取的很好呢

我是用原质粒，也就是转染前的质粒在相同条件下做PCR，作为对照，提取的“质粒”适当稀释（最好先测下浓度）后做PCR，电泳后看原质粒与你所提的“质粒”在相同的位置上有没有相同的条带，如在相同的位置有相同的条带，并且很亮，条带清晰，单一，说明所提质粒较纯净吧，我是这样想的……
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加油……
6楼2012-11-05 14:31:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
楼主最好把电泳图谱贴一张上来，大家好帮你分析
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-08-24 18:55:50
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wangtaodluf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我怀疑是你PCR的问题，质粒提取是最简单的实验，出问题的可能性很小。说说你PCR的体系和条件。
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3楼2012-08-24 19:51:21
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zy晨曦

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

电泳图片中的三条带怎样才算质粒提取的很好呢
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日事日毕，日清日高
4楼2012-11-03 08:50:27
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