24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1252  |  回复: 6

qianhaobei

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取质粒

关于质粒的提取:我小提用的是天根小题中量质粒试剂盒,大提用的是无内毒素质粒大提试剂盒,提的是大肠杆菌,已经三个星期了,还没成功!小提后PCR,质粒在对照片段的条带有点虚,大提后PCR,琼脂糖凝胶电泳分析,在对照片段下面和上面有条带,应该是引物二聚体和模板吧,同样的条件下,原来的质粒条带清晰明亮,可我提的质粒PCR就是扩不出来,但测定浓度是498ng/μl。我的质粒大小是15150bp,扩增片段是438bp。请虫友们指点……感激不尽!
回复此楼
加油……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

楼主最好把电泳图谱贴一张上来,大家好帮你分析
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-08-24 18:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtaodluf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我怀疑是你PCR的问题,质粒提取是最简单的实验,出问题的可能性很小。说说你PCR的体系和条件。
3楼2012-08-24 19:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy晨曦

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

电泳图片中的三条带怎样才算质粒提取的很好呢
日事日毕,日清日高
4楼2012-11-03 08:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianhaobei

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangtaodluf at 2012-08-24 19:51:21
我怀疑是你PCR的问题,质粒提取是最简单的实验,出问题的可能性很小。说说你PCR的体系和条件。

非常感谢您的关注,是转染质粒的浓度有问题,导致转染失败, 后来讲质粒稀释以后重新转染就好了。
加油……
5楼2012-11-05 14:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianhaobei

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zy晨曦 at 2012-11-03 08:50:27
电泳图片中的三条带怎样才算质粒提取的很好呢

我是用原质粒,也就是转染前的质粒在相同条件下做PCR,作为对照,提取的“质粒”适当稀释(最好先测下浓度)后做PCR,电泳后看原质粒与你所提的“质粒”在相同的位置上有没有相同的条带,如在相同的位置有相同的条带,并且很亮,条带清晰,单一,说明所提质粒较纯净吧,我是这样想的……
加油……
6楼2012-11-05 14:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湘水悠悠

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也要做这个提取  个人觉得应该问题不大吧  就用试剂盒就可以了啊  除非是你操作的问题吧
我最喜欢你,因为你让我活的最像自己
7楼2013-09-18 16:33:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qianhaobei 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +35 洛神哥哥 2026-03-31 37/1850 2026-04-03 14:24 by 玲玲0606
[考研] 11408,284分,二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +8 lmnlzy 2026-03-30 8/400 2026-04-03 13:08 by nalakaiqi
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +9 AZMK 2026-03-28 13/650 2026-04-03 11:18 by qqq850810
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +9 恬淡ye 2026-03-31 10/500 2026-04-03 11:10 by txp1986
[考研] 求调剂!生物与医药专硕 +4 逆转陆先生 2026-04-01 5/250 2026-04-03 08:33 by Jaylen.
[考研] 一志愿复旦材料,英一专硕,总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 264分,求任意工科调剂 +4 zzlqwq 2026-03-29 5/250 2026-04-02 17:17 by 何曾几何
[考研] 348求调剂 +11 zzzzyk123 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:52 by Wang200018
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +26 材料学257求调剂 2026-03-28 27/1350 2026-04-02 15:15 by chyhaha
[考研] 085601一志愿中山大学深圳材料工程330求调剂 +8 pipiver 2026-03-30 8/400 2026-04-02 12:01 by ms629
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 一志愿北京科技,085601总分305求调剂 +9 半生瓜! 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 070300一志愿211,312分求调剂院校 +14 小黄鸭宝 2026-03-30 14/700 2026-04-01 20:19 by 赖春艳
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 289求调剂 +7 BrightLL 2026-03-29 7/350 2026-03-31 22:05 by 544594351
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +9 真名有冰 2026-03-29 10/500 2026-03-31 18:01 by xhai2011
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
信息提示
请填处理意见