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自然_法则

银虫 (初入文坛)

[求助] 核酸电泳图

图中带1,2是同一种PCR产物,3,4也是同一种PCR产物,5是Marker2000,6,7是质粒的DNA 无果(没有加RNA酶)8是Marker10000。 我用的染料是Ultra Power 25ml胶里加入2.5ul 染料。求解释为什么条带不整齐 越往上条带越模糊 谢谢

核酸电泳图PCR产物
每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的胶用的多大浓度的?估计你的点样孔有点问题,或者你上样的时候把胶戳破了。
2楼2012-08-24 09:21:44
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tapmun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

marker这样子,肯定跟跑胶有关,可能是琼脂糖的问题,或者电压,或者缓冲液
业精于勤荒于嬉,行成于思而毁于随
3楼2012-08-24 09:47:15
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wyg888

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
自然_法则: 回帖置顶 2012-08-24 15:56:06
自然_法则: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-27 11:53:46
首先是胶的配制问题,从跑的带来看可能是由于配胶时各个原料没有混合均匀,导致胶的疏密不均。第二可能跟胶有关,尤其琼脂糖的质量问题。第三是由于跑胶是的电压问题,有的时候电压过高会出现这种情况。再就是一个重要原因是缓冲液也就是电极液的问题,我在做试验的时候也出现过这种问题,主要是因为电极液用的时间过长或者是里面掺了很多杂质。
每天都有一个新的开始!
4楼2012-08-24 10:51:21
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自然_法则

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wyg888 at 2012-08-24 10:51:21
首先是胶的配制问题,从跑的带来看可能是由于配胶时各个原料没有混合均匀,导致胶的疏密不均。第二可能跟胶有关,尤其琼脂糖的质量问题。第三是由于跑胶是的电压问题,有的时候电压过高会出现这种情况。再就是一个重 ...

谢谢  电极液我新配的  第一次用  电压是50V 琼脂糖是进口的 以前一直用她跑的都没问题 这样看来可能是胶没混合均匀吧 我就只让它沸腾了一次 看着晶晶亮就制胶了 谢谢回答
每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
5楼2012-08-24 15:54:21
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自然_法则

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-24 09:21:44
你的胶用的多大浓度的?估计你的点样孔有点问题,或者你上样的时候把胶戳破了。

按1%100配的  可能是由于有一个孔穿了吧 那这回导致上述问题吗
每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
6楼2012-08-24 15:55:47
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chenguestc

木虫 (职业作家)

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自然_法则: 金币+1, 有帮助 2012-08-27 11:52:47
1,首先,你的质粒分子量太小,似乎没有提出来。
2,你的主带上面有SMEAR,造成这种情况的原因,可能是退火温度偏低,镁离子浓度过高,或者模板量太高,或者跑胶电压太大。可以通过提高退火温度,降低镁离子浓度,降低模板量,加入DMSO增加特异性等来解决。
3,带弯曲,是胶的原因。制胶时可以多煮沸一会,中间用转子混匀一下。
7楼2012-08-26 11:27:48
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
自然_法则: 金币+2, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2012-08-27 11:52:09
自然_法则: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-27 11:53:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by 自然_法则 at 2012-08-24 15:55:47
按1%100配的  可能是由于有一个孔穿了吧 那这回导致上述问题吗...

点样孔在拔梳子的时候弄得不好,或者胶融化不完全,会出现那种弯曲条带。
8楼2012-08-27 10:39:59
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冻池

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先,配制胶的时候要把琼脂糖充分溶解,到溶液里没有琼脂糖了,核酸染料应该没有问题,脚的浓度再配大一点,拔梳子的时候注意点,不要把胶孔弄破了,直上直下的拔起来就应该没有问题,点样的时候不要上样太多,最好不要漫出点样孔,最后电泳时电压低一点,时间长一点,前面的显色液最多过了2/3胶板长度就可以了,感觉你跑胶时间也有点久,都有点模糊了。这样改进下应该就没有什么问题了,祝好运
各位大侠多多赐教
9楼2012-08-27 19:51:53
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83739113

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

染料加多了,严格按照说明书浓度加
10楼2012-08-29 12:11:00
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