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自然_法则

银虫 (初入文坛)

[求助] 核酸电泳图

图中带1，2是同一种PCR产物，3，4也是同一种PCR产物，5是Marker2000,6,7是质粒的DNA 无果（没有加RNA酶）8是Marker10000。 我用的染料是Ultra Power 25ml胶里加入2.5ul 染料。求解释为什么条带不整齐 越往上条带越模糊 谢谢

核酸电泳图PCR产物
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每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
1楼 2012-08-24 09:01:35
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回帖置顶 ( 共有2个 )

wyg888

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
自然_法则: 回帖置顶 2012-08-24 15:56:06
自然_法则: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-27 11:53:46
首先是胶的配制问题，从跑的带来看可能是由于配胶时各个原料没有混合均匀，导致胶的疏密不均。第二可能跟胶有关，尤其琼脂糖的质量问题。第三是由于跑胶是的电压问题，有的时候电压过高会出现这种情况。再就是一个重要原因是缓冲液也就是电极液的问题，我在做试验的时候也出现过这种问题，主要是因为电极液用的时间过长或者是里面掺了很多杂质。
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每天都有一个新的开始！
4楼2012-08-24 10:51:21
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
自然_法则: 金币+2, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2012-08-27 11:52:09
自然_法则: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-27 11:53:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by 自然_法则 at 2012-08-24 15:55:47
按1%100配的  可能是由于有一个孔穿了吧 那这回导致上述问题吗...

点样孔在拔梳子的时候弄得不好，或者胶融化不完全，会出现那种弯曲条带。
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8楼2012-08-27 10:39:59
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普通回帖

huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的胶用的多大浓度的？估计你的点样孔有点问题，或者你上样的时候把胶戳破了。
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2楼2012-08-24 09:21:44
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tapmun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

marker这样子，肯定跟跑胶有关，可能是琼脂糖的问题，或者电压，或者缓冲液
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业精于勤荒于嬉，行成于思而毁于随
3楼2012-08-24 09:47:15
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自然_法则

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wyg888 at 2012-08-24 10:51:21
首先是胶的配制问题，从跑的带来看可能是由于配胶时各个原料没有混合均匀，导致胶的疏密不均。第二可能跟胶有关，尤其琼脂糖的质量问题。第三是由于跑胶是的电压问题，有的时候电压过高会出现这种情况。再就是一个重 ...

谢谢  电极液我新配的  第一次用  电压是50V 琼脂糖是进口的 以前一直用她跑的都没问题 这样看来可能是胶没混合均匀吧 我就只让它沸腾了一次 看着晶晶亮就制胶了 谢谢回答
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每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
5楼2012-08-24 15:54:21
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自然_法则

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-24 09:21:44
你的胶用的多大浓度的？估计你的点样孔有点问题，或者你上样的时候把胶戳破了。

按1%100配的  可能是由于有一个孔穿了吧 那这回导致上述问题吗
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每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
6楼2012-08-24 15:55:47
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
自然_法则: 金币+1, ★有帮助 2012-08-27 11:52:47
1，首先，你的质粒分子量太小，似乎没有提出来。
2，你的主带上面有SMEAR，造成这种情况的原因，可能是退火温度偏低，镁离子浓度过高，或者模板量太高，或者跑胶电压太大。可以通过提高退火温度，降低镁离子浓度，降低模板量，加入DMSO增加特异性等来解决。
3，带弯曲，是胶的原因。制胶时可以多煮沸一会，中间用转子混匀一下。
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7楼2012-08-26 11:27:48
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冻池

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先，配制胶的时候要把琼脂糖充分溶解，到溶液里没有琼脂糖了，核酸染料应该没有问题，脚的浓度再配大一点，拔梳子的时候注意点，不要把胶孔弄破了，直上直下的拔起来就应该没有问题，点样的时候不要上样太多，最好不要漫出点样孔，最后电泳时电压低一点，时间长一点，前面的显色液最多过了2/3胶板长度就可以了，感觉你跑胶时间也有点久，都有点模糊了。这样改进下应该就没有什么问题了，祝好运
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各位大侠多多赐教
9楼2012-08-27 19:51:53
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83739113

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

染料加多了，严格按照说明书浓度加
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10楼2012-08-29 12:11:00
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