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lxh502976898金虫 (小有名气)
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[交流]
原核表达载体的构建 已有17人参与
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| 我第一次接触原核表达载体的构建 就一直连接不成功 回收后的目的片段和表达载体做电泳都有单一条带，二者连接液没有任何条带（我用的是宝生物胶回收试剂盒，DNA的浓度特别低，怀疑是这个原因） 无法判断是否连接成功 。前两次直接做转化也没有任何菌长出来，继续帮助，实验停滞了 谢谢啦。。。。 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-27 13:46:54
amisking: 回帖置顶 2012-08-28 19:33:48
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-27 13:46:54
amisking: 回帖置顶 2012-08-28 19:33:48
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转化转不出来应该从以下几个方面找原因： 1.感受态细胞是否有效，因此每次转化时都应该做阳性对照 2.酶切是否有效，一般先连T载体，然后酶切连表达载体是最有效的方法，但是成本也是最高的。如果直接酶切PCR产物的话，一定要加保护碱基，不然导致切不动，另外酶切时间不能过长，一般为三个小时，过长的话酶会有星活力的表现 3.连接比例是否合适，载体和基因的浓度太低或者太高都会影响连接效率，一般连接体系可以设置为20ul及以下，载体的量一般为60ng,基因的量控制在60ng-100ng之间 希望对你有帮助 |
13楼2012-08-26 11:22:32
强！虫子立起！ 2楼2012-08-23 09:59:19
3楼2012-08-23 10:00:05
4楼2012-08-23 13:43:33