8楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-23 12:24:07
一般情况下，测序只能保证600左右的准确性，虽然说每个反应在800bp左右，但两端的序列一般都不太保准，可以选择测通试试

9楼: Originally posted by wittyjc at 2012-08-23 13:51:27
个人意见，你的序列里有特殊结构，比如较长的poly结构、发卡结构等，都会影响测序，有时甚至导致测序无法进行。

7楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-23 12:22:33
你可以试着做一下tblastX分析，就是用的核苷酸序列去检索蛋白质。
存在一个情况就是：很多核苷酸不一定相似，但能够检索出相似的蛋白质。物种之间存在密码子的偏爱...

10楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 22:06:00
嗯，只能再问一下了，但没有上游引物的话，也能通过Walking方法测通吗？
实在不行的话 重新设计引物，重新送样了
谢啦...

13楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 22:18:00
如果是没有blast出来对比序列，直接用核苷酸序列去检索蛋白质，会有结果吗？试试喽
不过刚看了看，不行，同源性太差了...

15楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-24 08:45:52
比对之前去完载体序列了吗？
你分析一下测序结果中有没有你需要的完整的ORF，如果你的ORF从头到尾没有双峰出现的话，先向下开展实验吧。
如果影响你的实验的话，换一家公司试试，我以前在金斯特碰到过这种情况， ...

14楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-24 08:33:39
你让测序公司帮你设计引物，他会用软件先进行一下评价，看适不适合测序，准确性会高一点，实在不行就直接做克隆得了，这样会更准确...