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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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刁寒冰

银虫 (小有名气)

[交流] 测序 已有4人参与

之前做的PCR产物送到上海英峻那边去测序，就是单一条带，750bp，然后测序结果是上游出现后双峰，而下游测通了，有点糊涂了！想问知道的大虾，咋回事呢？
  还有我另一个条带测序，得到序列后去NCBI-blast嗯，但还是没有结果，反向序列也试过，还是比对不出来呢？不知怎么回事呢？

[ Last edited by 刁寒冰 on 2012-8-22 at 15:07 ]
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1楼 2012-08-22 14:05:45
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:46:57
引用回帖:
13楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 22:18:00
如果是没有blast出来对比序列，直接用核苷酸序列去检索蛋白质，会有结果吗？试试喽
不过刚看了看，不行，同源性太差了...

比对之前去完载体序列了吗？
你分析一下测序结果中有没有你需要的完整的ORF，如果你的ORF从头到尾没有双峰出现的话，先向下开展实验吧。
如果影响你的实验的话，换一家公司试试，我以前在金斯特碰到过这种情况，后来换生工测序，问题解决了
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15楼2012-08-24 08:45:52
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-23 15:53:25
测序的事情我不是很清楚，所以就回答你后面的问题。

你说比对没有结果，我估计是你选类别的时候选错了，比如做的是微生物却选择了与人类的基因比较。这样的话，肯定是没有结果的啊!

不知道是不是这个原因。不过假如不是新基因的话，应该就是这个原因没错了，也是我经常犯的错。

希望有点帮助。
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2楼2012-08-22 16:33:01
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jl860822

金虫 (正式写手)
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，七夕快乐 2012-08-23 15:53:40
后面的问题，楼上已经帮你解答了，我回答前面的吧，你的正向引物可能适合常规扩增，但是并不适合测序，因为测序对引物要求高点，然后你的反向引物测通的意思就是你的反向引物是可用的，你先比对一下，是不是你要的序列，它可能靠近引物的几十个bp不太准确
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3楼2012-08-23 08:38:55
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-23 08:38:55
后面的问题，楼上已经帮你解答了，我回答前面的吧，你的正向引物可能适合常规扩增，但是并不适合测序，因为测序对引物要求高点，然后你的反向引物测通的意思就是你的反向引物是可用的，你先比对一下，是不是你要的序 ...

你的意思是说，我只用反向测出的序列对比的话，在确定一下，那没有正向的序列跟对比结果没有影响吗？
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4楼2012-08-23 10:49:17
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