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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

[求助] 关于Dnase1

有谁用过worthington 公司的Dnase1啊，本人买的是粉末状的，不知道，该如何用什么样的buffer稀释比较好，以及该酶的反应条件，求大侠指教
本人主要是提取RNA来去除其中的DNA的
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1楼 2012-08-21 20:21:03
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
追梦的人1987: 金币+3 2012-08-23 17:07:52
该酶活性依赖Ca离子，Mg离子存在可以激活其活性。我们常用的酶切缓冲液：50mMTris-HCl,pH7.5~8.0, 1mMCaCl2,10mM MgCl2，用其溶解粉末就行，最后配成的活力单位是10U/ml，酶切需要37度10min吧，你可以自己跑胶检测。注意：不能含有超过50mM的盐，否则会抑制其活力，EDTA和还原剂也不要含有。祝你好运
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小小爬虫
2楼2012-08-23 16:35:36
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daguo0648 at 2012-08-23 16:35:36
该酶活性依赖Ca离子，Mg离子存在可以激活其活性。我们常用的酶切缓冲液：50mMTris-HCl,pH7.5~8.0, 1mMCaCl2,10mM MgCl2，用其溶解粉末就行，最后配成的活力单位是10U/ml，酶切需要37度10min吧，你可以自己跑胶检测。 ...

弱弱的问一下，如何终止反应啊，如果提RNA的话，应该在哪一步加入啊，我用的是trizol法提取RNA的，还有酶切缓冲液配时，除了用DEPC水外，还有什么要求没
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3楼2012-08-23 17:05:27
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-08-23 17:05:27
弱弱的问一下，如何终止反应啊，如果提RNA的话，应该在哪一步加入啊，我用的是trizol法提取RNA的，还有酶切缓冲液配时，除了用DEPC水外，还有什么要求没...

所谓终止反应就是是该酶失活或者活性抑制。加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。
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小小爬虫
4楼2012-09-04 14:09:08
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