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简单HE认真

木虫 (小有名气)

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[求助] 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？已有2人参与

菌体定位后，目的蛋白在沉淀中，即包涵体表达，但是包含体没办法溶解，请教一下各位该怎麽办?顺便问一下，可否加一点表变活性剂或乙醇以增加疏水性蛋白的溶解...

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简单做人，认真做事。

1楼 2012-08-18 15:59:42

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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-08-21 16:16:03

你好，我们实验室也长期苦于蛋白在包涵体里，你可以用上边说的6M或者8M尿素溶解之后透析，透析之后尿素浓度降低了就能过镍柱了，不过如果透析过程中析出，那你就惨了。。。。。低温诱导25度过夜诱导效果还可以，有一部分可以溶解，不过这个全看运气了。。。。。还有就是你用的感受态细胞，据说有一种什么东西缺陷的感受态细胞，但是我们没看见有卖的，你要是看见了告诉我哦

。。。。。。。。还有就是，我们实验室因为需要表达的蛋白特别多而且特别大，建立了一个昆虫细胞的表达系统，基本都是可溶的，就是需要多装几个载体~~~~