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lentinula

铁虫 (初入文坛)

[求助] 菌丝总蛋白提取方法 已有1人参与

酚抽提法和TCA-丙酮沉淀法提取菌丝总蛋白质,哪个更合适一些?或者有其他更好的办法?谢谢~~
我是第一次提取胞内总蛋白质,用于单向电泳,请虫哥虫姐们多多指教啊啊啊。
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我做过类似的,真菌菌丝提取总蛋白质,我的方法如下:
1,菌丝过0.22um的膜,分离培养液和菌丝,完成可以称量菌丝鲜重;
2,过滤后的菌丝冻干处理24h,得到菌丝干物质;
3,得到的干物质在冰上用预冷的组织研磨器处理,加入少量buffer,可以使研磨更为彻底。
4,所得到的总蛋白提取液6000g离心,即为总蛋白;
之前使用酚抽法,存在蛋白丢失的问题,TCA没有做。后来我都是直接把提取液冻干浓缩到需要的浓度然后直接上样,跑出来污染也不似很明显。
2楼2015-02-06 16:01:23
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