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lentinula

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1295565
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性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 菌丝总蛋白提取方法已有1人参与

酚抽提法和TCA-丙酮沉淀法提取菌丝总蛋白质，哪个更合适一些？或者有其他更好的办法？谢谢~~
我是第一次提取胞内总蛋白质，用于单向电泳，请虫哥虫姐们多多指教啊啊啊。

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1楼 2012-08-17 10:37:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

在下狒狒

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 30
在线: 12小时
虫号: 2572800
注册: 2013-07-30
专业: 环境变化与预测

【答案】应助回帖

我做过类似的，真菌菌丝提取总蛋白质，我的方法如下：
1，菌丝过0.22um的膜，分离培养液和菌丝，完成可以称量菌丝鲜重；
2，过滤后的菌丝冻干处理24h，得到菌丝干物质；
3，得到的干物质在冰上用预冷的组织研磨器处理，加入少量buffer，可以使研磨更为彻底。
4，所得到的总蛋白提取液6000g离心，即为总蛋白；
之前使用酚抽法，存在蛋白丢失的问题，TCA没有做。后来我都是直接把提取液冻干浓缩到需要的浓度然后直接上样，跑出来污染也不似很明显。

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