| 查看: 971 | 回复: 2 | ||
[求助]
通过温敏质粒构建链球菌基因缺失
|
|
请求研究相关方向的前辈帮助: 小弟去年开始做链球菌基因敲出试验的,使用的是温敏穿梭载体,通过融合PCR将上游同源臂(1000bp),抗性基因(CAT),下游同源臂(800bp)连在一起,电转化后按照之前的文献报道的氯霉素抗性浓度进行筛选,具体筛选方式如下: 1,通过28度+穿梭载体上抗性基因的抗生素,肉汤里传代2次; 2,通过37度+穿梭载体上抗性基因的抗生素,肉汤里传代3次; 3,通过28度+不加任何抗生素,肉汤里传代5次; 4,将无抗传代5次的菌液普于含氯霉素(5μg/ml)的抗性平板上,28度培养两天; 这个方法是参考外文里的方法做的,但是我做了将近两个月还是没有在氯霉素平板上看见什么长出,不知道方法有没有问题,恳请研究相关方向的前辈指点. 还有就是我的氯霉素抗性基因是660bp,刚好是cat的CDS区,我之前看其他人用其他载体做缺失时都在抗性基因前面加入了一个启动子,不知道这个有没有影响.对于做缺失是不是一定要加启动子或者在那种情况下架启动子,我很茫然,希望各位前辈能提供宝贵意见! |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有94人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
2楼2013-07-30 15:01:06
3楼2015-09-23 14:29:29
10