| 查看: 1165 | 回复: 2 | ||
[求助]
通过温敏质粒构建链球菌基因缺失
|
|
请求研究相关方向的前辈帮助: 小弟去年开始做链球菌基因敲出试验的,使用的是温敏穿梭载体,通过融合PCR将上游同源臂(1000bp),抗性基因(CAT),下游同源臂(800bp)连在一起,电转化后按照之前的文献报道的氯霉素抗性浓度进行筛选,具体筛选方式如下: 1,通过28度+穿梭载体上抗性基因的抗生素,肉汤里传代2次; 2,通过37度+穿梭载体上抗性基因的抗生素,肉汤里传代3次; 3,通过28度+不加任何抗生素,肉汤里传代5次; 4,将无抗传代5次的菌液普于含氯霉素(5μg/ml)的抗性平板上,28度培养两天; 这个方法是参考外文里的方法做的,但是我做了将近两个月还是没有在氯霉素平板上看见什么长出,不知道方法有没有问题,恳请研究相关方向的前辈指点. 还有就是我的氯霉素抗性基因是660bp,刚好是cat的CDS区,我之前看其他人用其他载体做缺失时都在抗性基因前面加入了一个启动子,不知道这个有没有影响.对于做缺失是不是一定要加启动子或者在那种情况下架启动子,我很茫然,希望各位前辈能提供宝贵意见! |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有186人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
2楼2013-07-30 15:01:06
3楼2015-09-23 14:29:29