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LOTOS886

木虫 (小有名气)

[求助] 有关RT-PCR,请教有经验的虫友!先谢了!

小弟,现在想做RT-PCR,需要提取癌细胞总RNA,然后反转录为cDNA,再进行Real time PCR定量分析。
1、请问,用哪家公司的试剂盒比较好,包括提RNA、cDNA合成、Real time PCR所用的试剂盒。
2、在用试剂盒提取RNA之前,需要对细胞做怎样的处理?比如,是否需要裂解细胞?若需要,用什么试剂,该怎么做?

小弟试验比较着急,多谢诸位战友了!
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
天根的Trizol A+试剂提取总RNA,用全式金的试剂盒RT-PCR这个盒子比宝生物的便宜,而且比他们家的好用。经验总结,祝好运!
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
6楼2012-08-10 16:37:54
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
使用Invitrogen的Trizol试剂提取总RNA,然后做逆转录和RT-PCR,可以使用Takara的或者小日本的TOYOBO的,都挺好使的
2楼2012-08-10 13:06:36
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提取RNA可以用QIAgen或Invitrogen的试剂盒,反转录可以用QIAgen或ABI,real time就用ABI的吧,具体步骤和处理方法试剂盒说明书里都有的。
3楼2012-08-10 14:09:04
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蓝天_1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回答:1、可以试试TAKARA的性价比好
2、提取RNA时,Trizol有自带说明书,上面有具体的处理方法。
4楼2012-08-10 15:02:23
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