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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌超声破碎很久不见澄清仍是白色的
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yuyiqingyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xuqingchun33 at 2012-08-13 13:10:34
你诱导的条件大多在包涵体里，可以试试低温低IPTG诱导

今天正准备做下低温诱导20度
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11楼2012-08-13 18:39:38
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心情一杯

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gjs713 at 2012-08-11 14:23:57
试试低温诱导 看效果如何

如果真是包涵体，那怎么纯化包涵体呢
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12楼2012-08-14 14:48:02
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yuyiqingyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 心情一杯 at 2012-08-14 14:48:02
如果真是包涵体，那怎么纯化包涵体呢...

纯化包涵体已经有步骤可以参考，许多文献里都找的到，就是不知道具体效果怎样。
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13楼2012-08-14 22:11:21
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 心情一杯 at 2012-08-14 14:48:02
如果真是包涵体，那怎么纯化包涵体呢...

可以先按照可溶性蛋白的方法一样的纯化，然后再复性，尿素复性最常见。
也可以先复性在纯化。
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
14楼2012-08-15 10:53:16
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yuyiqingyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xuqingchun33 at 2012-08-13 13:10:34
你诱导的条件大多在包涵体里，可以试试低温低IPTG诱导

我试过16度诱导，所谓的上清基本没有我要的蛋白，沉淀有目的蛋白但是浓度没有30度诱导沉淀里的多。估计会不会是菌变异了，之前37度诱导破碎的好好的，上清和沉淀里都有目的蛋白数量还挺多的，现在都在沉淀里而且不知道算不算破碎完全。
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15楼2012-08-15 17:29:36
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

实在没有办法就用包涵体进行纯化吧，祝好运
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在这个纷绕的世俗世界里，能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切，也是一种境界。
16楼2012-08-16 08:19:48
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tanglian8655

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

同意楼上的，低温诱导试一试。如果你取法判断是不是全部形成包涵体了，那就低温诱导试一试，或者减少诱导时间，你可以在前面分段收集菌体，跑电泳检测下，做一个时间梯度。
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17楼2012-08-16 10:58:21
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yuyiqingyang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xuqingchun33 at 2012-08-13 13:10:34
你诱导的条件大多在包涵体里，可以试试低温低IPTG诱导

低温诱导试过了，上清里还是没有目的蛋白。
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18楼2012-08-17 14:13:30
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M110935

金虫 (小有名气)
你好，我最近也做这个实验。请问你还有pET-32a的质粒或者转化了BL21的菌液吗？因为我自己在实验室提取的质粒效果不好，谢谢
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19楼2012-09-11 08:40:07
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jr8967

铜虫 (初入文坛)
我做大肠杆菌的超声时也是这种情况，好几次了总是超不开，头疼中。。。
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20楼2013-04-02 12:31:13
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