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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA遇到问题，向各位大侠请教
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kunqian11

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA遇到问题，向各位大侠请教

各位大侠，小女子目前正在建立紫杉醇的ELISA检测试剂盒。购买了abcam的anti-taxol antibody，外包做紫杉醇-BSA偶联（具体偶联方法不清）。
     用了两种方式做紫杉醇检测：
    一是紫杉醇偶联BSA后，包被、封闭，加入HRP标记的紫杉醇抗体（稀释倍数仅为200-300倍），加底物进行显色；
    二是包被紫杉醇抗体，封闭，加HRP标记的紫杉醇，加底物进行显色；
    两种试验测试的吸光度值均很低，且增大抗体或紫杉醇浓度后，吸光度值无明显变化。

       推测要么是抗体质量有问题，要么是我们的紫杉醇与BSA的偶联方式影响了亲和位点，导致抗体与紫杉醇亲和力下降。但是具体怎么分析问题的原因，又该采取什么方式进行改进呢？望各位大侠指点，不胜感激。
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1楼 2012-08-08 10:11:30
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kunqian11

新虫 (初入文坛)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-10-04 14:56:08
引用回帖:
10楼: Originally posted by ppsfxn at 2012-08-10 12:26:09
文献有做紫杉醇与BSA偶联蛋白的ELISA检测么？因紫杉醇太小，BSA太大，怕紫杉醇被BSA包裹住，就没办法检测了，你们是怎么做偶联的？...

文献上的方法是先在紫杉醇上连接一个桥连结构，然后以桥连结构与紫杉醇连接。我们的做法好像是紫杉醇的基团与BSA直接结合，有可能会像您所说的那样导致紫杉醇被BSA包裹住，而无法与抗体结合。关键是有没有人做小分子的结构改造呢？
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11楼2012-08-11 19:12:33
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
直接包被紫杉醇  用抗体检测一下
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2楼2012-08-08 10:15:18
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kunqian11

新虫 (初入文坛)
★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励应答！ 2012-08-08 16:18:19
引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-08-08 10:15:18
直接包被紫杉醇  用抗体检测一下

谢谢您的回复，不过紫杉醇必须与BSA偶联后才能进行包被啊。不知您说的是否是这个意思？能否再详细一点？谢谢！
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3楼2012-08-08 12:15:19
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-08-08 18:48:10
你怎么确定是是抗原或抗体的问题呢，其他的试剂都是没有问题的么？还有，抗体不能反复冻融，否则抗性就消失了。总之，确保每个试剂都是好用的，一个一个排除可能导致实验失败的因素。
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共同学习，共同进步，共同提高，加油！
4楼2012-08-08 12:58:41
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