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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

[求助] 4%PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)250bp处条带出现扭曲,求助!

如图,我用的是4%非变性聚丙烯酰胺凝胶,跑的是SRAP-PCR程序,两张图的marker都是DL2000,两张图里DL2000的100bp条带均已跑出,故扭曲/压缩处对应的分子量是250bp。
请问这种统一而有规律的条带扭曲是怎么形成的,如何避免?

SRAP01



SRAP02
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

有结果了,的确是溴酚兰的问题,有图为证。

以下两板来自同一个电泳槽(所以跟电压和缓冲液无关),跑的是SRAP分子标记,两板的marker都是DL2000,可以发现用旧溴酚兰上样的那板扭曲依旧,且扭曲线(略小于250bp)下方的条带已经模糊不清;而用新溴酚兰的那板不仅没有扭曲线,100bp处的条带照样清晰可见。

wu_shiyong和mlanqiang说得没错,在此特别感谢二位!

另外说明一下旧溴酚兰是用楼上组培用的廉价蔗糖配的,而新溴酚兰是用分析纯级蔗糖配的,看来分子实验果然不能用便宜货啊。

旧溴酚兰,6%非变性胶



新溴酚兰,6%非变性胶

17楼2012-08-09 22:08:49
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是胶有问题啊
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
2楼2012-08-06 20:43:06
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-07 15:41:10
coal@live.cn: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 正解啊! 2012-08-09 22:10:53
跑时溴酚蓝成一条很浓的直线,没有分开。
电压低点,还有把你用的溴酚蓝换啦,重新配。
低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-08-07 10:02:45
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wq123good

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-07 15:41:19
有低电压慢慢跑,底部的溴酚蓝是你自己切下去的吧,要等它自己从胶中跑出来
胶的底部气泡是否排出干净,这个很重要
过好每一天
4楼2012-08-07 11:25:58
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