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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

[求助] 4%PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)250bp处条带出现扭曲,求助!

如图,我用的是4%非变性聚丙烯酰胺凝胶,跑的是SRAP-PCR程序,两张图的marker都是DL2000,两张图里DL2000的100bp条带均已跑出,故扭曲/压缩处对应的分子量是250bp。
请问这种统一而有规律的条带扭曲是怎么形成的,如何避免?

SRAP01



SRAP02
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-07 19:18:48
1,调低电泳电压。
2,电泳前确保胶下部没有气泡。
3,夹夹子时两面过紧或过松也容易出现类似现象。
此外,楼主PCR条件还需要调整,你的整个泳道几乎都是SMEAR.

10cm长的胶,用DYY-6C型电泳仪,加120V电压(相当于6V/cm),应该不算高吧?

下部无气泡,玻璃板下面的缺失部分是用来封胶(封槽子)的琼脂糖,显影前我就剥掉了。

槽子受力不均可以部分解释第一张图,但是第二张图没这个问题,另外再提一下,我关注的问题是:为什么扭曲会如此有规律地出现在在250bp左右,且基本呈一条直线。这一点受力不均可解释不了。
13楼2012-08-08 20:03:40
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是胶有问题啊
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
2楼2012-08-06 20:43:06
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-07 15:41:10
coal@live.cn: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 正解啊! 2012-08-09 22:10:53
跑时溴酚蓝成一条很浓的直线,没有分开。
电压低点,还有把你用的溴酚蓝换啦,重新配。
低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-08-07 10:02:45
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wq123good

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-07 15:41:19
有低电压慢慢跑,底部的溴酚蓝是你自己切下去的吧,要等它自己从胶中跑出来
胶的底部气泡是否排出干净,这个很重要
过好每一天
4楼2012-08-07 11:25:58
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