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龙啸0216

铜虫 (初入文坛)

[求助] 谁做过脱氢酶活性啊?

取泥样10g放入锥形瓶内,用等量的生理盐水充分搅拌,4000r/min离心10min沉淀,弃去上清液,如此反复2次。称取沉淀的污泥1g加入40ml Tris缓冲液,在室温下置1h并经常搅拌,过滤后的滤液即为酶液(这是论文里看来的,然后就说按照相关文献中改良的TTC法测定。。。)
以下是我从那篇文献中看到的方法:
准确取定量的实验待用菌液,加入Tris缓冲液2ml,置于37℃恒温培养箱中,反应
2小时显色后,准确加入三氯甲烷溶液5ml,在常温下进行萃取。放置片刻,待溶液分层后,移至比色皿中。分光光度计在波长485nm下的吸光值。将1小时产生1ugTF的量定义为一个酶活力单位。
我的问题是:是直接对酶液进行萃取吗?
            是测试产生沉淀的吸光值吗?
            如何确定“1小时产生1ugTF的量定义为一个酶活力单位。”
新手不太懂,请大侠帮忙~
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新兵蛋子~~~
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