24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 865  |  回复: 14

wangmin2010

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
10楼: Originally posted by 84146922 at 2012-08-01 19:59:15
个人有些想法:
1.先确保载体被切开,分别用你的两种酶单酶切,双酶切,然后跑胶,没有问题再往下做。
2.再确认下酶的说明书,PCR产物有些要求,是要切久一点的,不过,你切4h,应该够了。回收后的效率如何,PCR产 ...

单酶切,双酶切,都试过了,都能发出来,回收后跑电泳条带也挺亮的,可就是连不上
连接酶也换新的,
感受态是自己做的,涂质粒没问题,能涨一板子
在连接体系中载体与目的片段的各处比例都试过了,都连不下30次了
自己的人生是要靠自己改变的!
11楼2012-08-01 20:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wt3532

专家顾问

涛声依旧

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-02 15:40:11
分析了这么多原因还做不出来。
有个疑问是酶切后的片段跑电泳亮不亮?
载体酶切很容易看出是否没酶切完全(分别作单酶切看看条带大小)
就是PCR片段酶切可能出问题。(不知道你片段上有没有加保护碱基,如果没有,肯定切不出来)
实在不行,可以将你PCR片段纯化后(普通taq酶),与T载体连接,转化到大肠杆菌中,扩增,抽质粒,然后再进行酶切,回收目的片段。(有时候有些酶的保护碱基要求比较严格,通过PCR方法加保护碱基不是很现实,可以通过该方法使酶切变得容易)
最后预祝实验成功。
12楼2012-08-02 10:57:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wt3532

兑换贵宾

涛声依旧

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

还有就是你抗生素母液会不会配错了或者加多了
13楼2012-08-02 11:00:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangmin2010

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
13楼: Originally posted by wt3532 at 2012-08-02 11:00:36
还有就是你抗生素母液会不会配错了或者加多了

谢谢你的应助!
酶切后的片段跑电泳挺亮的啊,我的目的片段上有没有保护碱基,我现在不知道,这个质粒是我们实验室以前构建的
抗生素母液应该没问题吧,因为质粒能长啊
我试试你说的方法吧,先连T载体上,然后在往下做。
自己的人生是要靠自己改变的!
14楼2012-08-02 19:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaodao1

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主要不要先试试用连接T载体,然后酶切?
15楼2012-08-02 21:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangmin2010 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业 +3 what张 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:45 by dongzh2009
[考研] 一志愿西安交大材料学硕(英一数二)347,求调剂到高分子/材料相关专业 +7 zju51 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:35 by CFQZAFU
[考研] 材料科学与工程339求调剂 +11 hyz0119 2026-03-31 12/600 2026-04-01 18:40 by 伟大河北
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +7 cs0106 2026-04-01 8/400 2026-04-01 18:34 by 记事本2026
[考研] 找调剂 +5 楚乔乔 2026-04-01 5/250 2026-04-01 16:12 by w虫虫123
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +8 YYYYYNNNNN 2026-03-26 10/500 2026-04-01 14:39 by hexingyi
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 120+4 Yishengeryi 2026-03-30 5/250 2026-04-01 14:11 by 陆小果画大饼
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +7 hanamiko 2026-03-30 7/350 2026-04-01 13:22 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +14 秋二十二 2026-03-30 14/700 2026-04-01 11:45 by chemdavid
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +4 元元青青 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:13 by syh9288
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 336材料求调剂 +10 陈滢莹 2026-03-26 12/600 2026-03-31 17:59 by jp9609
[考研] 367求调剂 +7 芋泥啵啵… 2026-03-28 7/350 2026-03-31 14:55 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 329求调剂 +8 星野? 2026-03-26 8/400 2026-03-30 13:41 by chemdavid
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
信息提示
请填处理意见