应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pEGFP重组载体转染细胞不发光，空载体发光，这是啥原因啊，急
52/1返回列表
查看: 2676  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

www.712100

新虫 (初入文坛)

[求助] pEGFP重组载体转染细胞不发光，空载体发光，这是啥原因啊，急 已有1人参与

如题，空质粒转染细胞后4小时就能看到部分细胞荧光，但是重组质粒一点都没有，转然后八小时在看还是这样。请教大家这是什么原因呢？我用的是N1，目的片段长度两千多。还有一个多月就该走了，没想到又遇到这个问题，求救啊，各位
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-29 11:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma0811

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请教一个类似的问题。最近在用pEGFP-N2载体做超表达，在293T细胞中用磷酸钙方法转染。从转染开始计时，24小时观察，空载质粒荧光80%以上，但是实验组一点亮光都没有。我的目的片段2712bp，检查目的载体模拟表达是可以正常表达。请问哪里会存在问题呢？希望各位大神帮忙，谢谢！
赞一下 回复此楼
13楼2015-04-11 11:07:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

somer2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-29 18:18:12
建议你耐心等一等，好歹给人家24小时以完成从DNA到蛋白质的过程。
等待的同时可以考虑：1、转染效率问题
                    2、目的蛋白的稳定性问题（容易降解的蛋白要把蛋白"半衰期"（half life）考察一下）
                    3、质粒构建问题（测序结果是否认真比对了等）
但愿有帮助。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-29 12:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-29 20:51:38
你确认电转染成功没有，GFP的荧光效果不错应该不会有问题，

你大概有多少colony。
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-29 15:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-30 13:38:13
重组之力移码突变的可能性很大，建议自己好好比对一下，移码突变之后GFP肯定不发光，另外观察荧光都是24H后，如果确定质粒没问题，就24小时后再看，你也太着急了吧。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-07-29 18:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭