24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 814  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[交流] 关于小片段连载体的问题 已有6人参与

大家来谈谈“小片段连载体一般会遇到什么问题”~

本人现在做的一个小片段才261bp,做了一个多月了,仍然没有找到重组子,但是在这之后来做的一个603bp的片段就很顺利,一下子就找到了很多重组子,并且现在已经测序正确了,这个只花了两周的时间。操作方法、连的载体、感受态细胞都一样,唯一不同的是序列不一样,再就是前者的His标签融合在N端,后者融合在C端,是不是因为这个有影响啊?为什么呢?

希望大家积极讨论,为我指点迷津啊~!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiuyunji

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你采用的是双酶切么?久攻不下的话,建议你尝试着采用两次单酶切,因为同一种酶单酶切体系下活力要高于双酶切体系
8楼2012-08-03 10:49:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

polepolar

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能的原因是261bp的片断太小,胶回收时容易丢失,最好是回收完后鉴定一下浓度。
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
2楼2012-07-24 12:33:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiongyaoling

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
目的片段你是用双酶切还是单酶切,检测酶切是否完全!
3楼2012-07-24 14:56:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
261bp不短了,20bp我都连过。是PCR产物,酶切片段?连T载体还是其它?
4楼2012-07-24 14:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 347求调剂 +10 山顶见α 2026-03-25 10/500 2026-03-31 13:44 by anny19840123
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +6 恬淡ye 2026-03-31 7/350 2026-03-31 11:28 by 恬淡ye
[考研] 328求调剂 +3 鹏鹏碰嘭嘭 2026-03-24 3/150 2026-03-31 10:56 by sophie2180
[考研] 材料专硕调剂 +12 椰椰。 2026-03-29 12/600 2026-03-31 10:52 by foria
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 本科211总分289,08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:48 by zhuangyan123
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 各位老师好,我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +10 Koxui 2026-03-28 10/500 2026-03-30 19:33 by 源_2020
[考研] 289求调剂 +16 新时代材料 2026-03-27 16/800 2026-03-30 19:04 by Wang200018
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 322求调剂:一志愿湖南大学 材料与化工(085600),已过六级。 +9 XX小邓 2026-03-29 9/450 2026-03-30 17:18 by limeifeng
[考研] 一志愿211,335分,0856,求调剂院校和导师 +7 倾____萧 2026-03-27 8/400 2026-03-30 09:37 by longlotian
[考研] 0856,材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
信息提示
请填处理意见