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植物叶片胰蛋白酶活怎么测定？
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| 植物叶片胰蛋白酶用BAEE做底物，Tris-Hcl做缓冲液，胰蛋白酶液是如何制备的？求教各位大侠了。。 |
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【答案】应助回帖
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gyfgood: 金币+5, 应助指数+1, 手机回答的，辛苦了！ 2012-11-18 21:28:04
gyfgood: 金币+5, 应助指数+1, 手机回答的，辛苦了！ 2012-11-18 21:28:04
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以苯甲酰L—精氨酸乙酯(英文缩写为BAEE)为底物，用紫外吸收法进行测定。苯甲酰L—精氨酸乙酯在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L—精氨酸(英文缩写为BA)。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L—精氨酸逐渐增多，反应体系的紫外吸收宜随之相应增加。 取2个光程为1厘米的带盖石英比色杯，分别加入25℃予热过的2.8ml底物溶液。向一只比色杯中加入0.2ml 0.001mol/L HCl，作为空白，校正仪器的253nm处光吸收零点。再在另一比色杯中加入0.2ml待测酶液(用量一般为10微克结晶的胰蛋白酶)，立即混匀并记时，每半分钟读数一次，共读3~4分钟。控制DA253/min 在0.05 ~ 0.100左右为宜。 绘制酶促反应动力学曲线，从曲线上求出反应起始点吸光度随时间的变化率(即初速度)DA253/min。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
4楼2012-11-18 10:19:54
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