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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 粗酶液的提纯
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王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] 粗酶液的提纯

最近在做真菌胞外酶的Native-PAGE，可是有几个样品胞外酶浓度太低，怕跑不出条带，求前辈们指点下如何能简单地提高粗酶液中酶的浓度而又不会破坏酶的活性
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1楼 2012-07-20 10:41:41
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王之御魂

木虫 (小有名气)
跑柱子什么的方法不适用，实验室没有这方面器材
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2楼2012-07-20 10:43:35
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-20 18:41:07
那比较方便的就是使用透析了，比较简单，直接。速度相对来说还行，可以试试看。
另外不要因为浓度低就怕跑不出条带，你不跑试试怎么知道呢？先尝试一下，然后再做做透析看看吧。
因为如果只是为了跑SDS-PAGE就做透析实在不值得。
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3楼2012-07-20 12:06:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, MicEPI+1, 我们的专家就是给力！！！！ 2012-07-20 21:20:08
王之御魂: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-20 22:31:08
透析时，物质会从浓度高的地方转移至浓度低的地方，所以如果透析外液的盐浓度比酶液的高，就会使酶液里的水出来，使体积变小，但是盐浓度变高之后跑胶条带会更加不清楚，不行的；如果透析外液的盐浓度比酶液的低，水就会进入酶液，使体积变大，更加看不清条带。

如果是超滤，可以除盐也可以浓缩体积，但是酶液要先除固体颗粒，因为滤膜堵了就浓缩不了。即使清洗了，也还会有一些残留，久了会堵塞的。

我觉得可以先旋转蒸发或者冻干浓缩体积，再脱盐（透析或者G25脱盐都行），这样可以获得低盐且体积小的样品。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2012-07-20 21:03:29
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-07-20 21:03:29
透析时，物质会从浓度高的地方转移至浓度低的地方，所以如果透析外液的盐浓度比酶液的高，就会使酶液里的水出来，使体积变小，但是盐浓度变高之后跑胶条带会更加不清楚，不行的；如果透析外液的盐浓度比酶液的低，水 ...

学习了，透析后盐浓度高了会使电泳条带更不清晰啊，这个之前真没注意。另外每页先除固体课题直接离心还是怎么做呢？
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5楼2012-07-20 21:51:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-20 21:51:34
学习了，透析后盐浓度高了会使电泳条带更不清晰啊，这个之前真没注意。另外每页先除固体课题直接离心还是怎么做呢？...

一般我们用的透析都是外液的盐浓度比内液低得多的，我说的方法是可以浓缩体积，不过用得有点另类，不适用于楼主。

除去固体物质可以离心和纱布过滤，要是去除得干净一些，那还得高速离心。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-07-20 22:58:08
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小猪芮蕊

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-07-20 21:03:29
透析时，物质会从浓度高的地方转移至浓度低的地方，所以如果透析外液的盐浓度比酶液的高，就会使酶液里的水出来，使体积变小，但是盐浓度变高之后跑胶条带会更加不清楚，不行的；如果透析外液的盐浓度比酶液的低，水 ...

冻干浓缩体积如何操作
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7楼2018-11-06 15:00:20
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