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tzaixmc木虫 (正式写手)
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[求助]
细菌基因组文库构建的相关问题
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目前想要用质粒pUCM-T建一个2-6kb的细菌基因组的质粒文库。实验室没人做过，啥也不懂，望高手出来解答一下。谢谢！ 1. 质粒载体酶切后要先切胶回收，再用CIAP处理完后再用切胶回收吗？ 2. 2-6kb的回收片段和末端磷酸化的载体连接时加入量多少比较合适？有人说按DNA载体和外源片断以6:1的摩尔比，那要分别加多少够做一次转化？ 3. 如果我想建这个库要8000的克隆，那我如果一次转化只有500个怎么办？是多做累积到8000个还是一次多做几管连接转化累计到8000个克隆？ 4. 对构建出来的文库我想用池的方式保存。我想要提取里面的质粒转化打另外一株菌中做活性检测，那这个质粒提取我是直接提取一个池的质粒，还是从这个池里接种一点到新的培养基中，培养起来再做转化？ 望高手出来解答一下啊，非常感谢！ |
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tzaixmc
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23楼2013-01-05 09:41:11
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