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linatracy金虫 (小有名气)
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[求助]
Elisa
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我正在测我免小鼠的血清抗体水平，可是呢，我做了一个对照就是不加一抗的，读出的值很大，这是为什么？ 求高手解释！谢谢 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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tupac225
金虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 怎么这么好的帖子，我现在才看见，奇怪中 2012-09-07 13:37:50
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 怎么这么好的帖子，我现在才看见，奇怪中 2012-09-07 13:37:50
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我觉得你的问题很常见，一般造成假阳性值高，也就是高背景的原因有如下几个: 1.孵育的时间过长和温度过高 2.不恰当的洗涤 3.试剂污染 4.孵育时酶标板被污染 5.盖板、容器或者枪头被污染 6.商家检测时酶标板底部有指纹或者其他痕迹 7.封闭液 针对您的问题 您可以逐一排查问题 1.只加二抗的孔您确认只加了二抗，且添加在这个孔的其他试剂不会带来污染 2.只加二抗的孔您确认洗涤足够充分而不过量，以及合适的二抗孵育的时间和问题 3.只加二抗的孔您确认检测的时候正确设置了检测波长和校正波长，或者正确设置了检测波长以及有空白对照 4.上机检测前用无残留擦镜纸轻轻擦拭板底 5.如以上都排除了，则考虑正是封闭液的问题，一般用BSA就可以的，如果不行，可以改用二抗来源的血清封闭如二抗是山羊抗小鼠的就用山羊封闭血清来封闭，浓度可以从1-3%都可以。 试着从这些方面找找原因，祝你实验成功。  |
2楼2012-07-18 22:33:04
linatracy
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3楼2012-07-18 22:51:36
loop00
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4楼2012-09-07 06:36:08
20