| 查看: 2088 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
琼脂糖凝胶电泳的拖尾问题~~~ 已有1人参与
|
|||
|
做了几次琼脂糖凝胶电泳，根据文献的条件做的，可就是重复不出来，严重拖尾，换了新电泳缓冲液，重新配制胶等方法都试过了，可就是不行~~~ 上图 大侠们帮忙分析分析吧，都做了太多次了，找不出原因呢~~~  电泳成像图 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有130人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
【答案】应助回帖
|
1. PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是： （1） 模板不纯：纯化模板 （2） Buffer不合适：更换Buffer （3） 退火温度偏低：适当提高退火温度 （4） 酶量过多：适量用酶，或调换另一种酶 （5） dNTP、Mg2+浓度偏高：适当降低dNTP和镁离子的浓度 （6） 循环次数过多：减少循环次数 （7） 模板量少或引物量过多：增加模板量，减少引物的用量 2. 提质粒的时候经常有这种个现象，有可能是样品浓度过高了。这种情况简单，稀释一下就行了。 3. 提基因组DNA的时候也常出现拖尾，最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质，蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作，减少蛋白质等杂质的出现。 4. 样品破碎或是被降解 5. 存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，经过纯化，RNAse处理，就没有了 6. 电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照 （1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。 （2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。 （3）电压太高：适当降低电压 （4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%, 分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。英格恩 |
12楼2015-09-21 16:52:38
2楼2012-07-18 20:02:56
3楼2012-07-19 11:27:13
linchenyu
铁虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 864.3
- 帖子: 65
- 在线: 78.6小时
- 虫号: 1578292
- 注册: 2012-01-15
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤研究体系新技术
4楼2012-07-19 13:16:52