[交流] efficiency of IP in embryonic stem cell

我在embryonic stem cell (Aniv 15)里做的ip,想找某个基因的co-factor.现在用的是santa cruz 的A/G beads.抗体孵育8h, beads孵育5h,洗八次共1h.基因的表达没有问题，蛋白表达量绝对够。之前在293T里做的效果很好。但是在胚胎干细胞里面做的效果就差啦 我现在做的都是用lysis体系 ，如下： 50 mM Tris-Cl  pH=7.4 150 mM NaCl             1 mM EDTA   10% Glycerol             1% triton X-100          上图是在胚胎干细胞里面做的ip，然后银染的结果，背景比较深，而且看不到ip下来的多余的band。 除开用高盐洗脱之外，还能有什么方法去除非特异性的背景吗？请教各位你们用的什么lysis 、binding、 washing buffer 配方啊？整个的实验流程是怎样的？谢谢啦 如能解决我的问题的还有追加金币••• [ Last edited by hwamg on 2012-7-16 at 10:41 ]

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