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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hwamg

银虫 (正式写手)


[交流] efficiency of IP in embryonic stem cell

我在embryonic stem cell (Aniv 15)里做的ip,想找某个基因的co-factor.现在用的是santa cruz 的A/G beads.抗体孵育8h, beads孵育5h,洗八次共1h.基因的表达没有问题,蛋白表达量绝对够。之前在293T里做的效果很好。但是在胚胎干细胞里面做的效果就差啦

我现在做的都是用lysis体系 ,如下:

50 mM Tris-Cl  pH=7.4
150 mM NaCl            
1 mM EDTA  
10% Glycerol            
1% triton X-100      


  

上图是在胚胎干细胞里面做的ip,然后银染的结果,背景比较深,而且看不到ip下来的多余的band。

除开用高盐洗脱之外,还能有什么方法去除非特异性的背景吗?请教各位你们用的什么lysis 、binding、 washing buffer 配方啊?整个的实验流程是怎样的?谢谢啦
如能解决我的问题的还有追加金币•••

[ Last edited by hwamg on 2012-7-16 at 10:41 ]
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hwamg

银虫 (正式写手)


怎么没人回帖呢?
2楼2012-07-19 23:03:33
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hwamg

银虫 (正式写手)


斑竹,申请关闭,诺诺的问一句能返还金币不?好伤心,没有回复···
3楼2012-12-06 22:06:37
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