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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » efficiency of IP in embryonic stem cell
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hwamg

银虫 (正式写手)

[交流] efficiency of IP in embryonic stem cell

我在embryonic stem cell (Aniv 15)里做的ip,想找某个基因的co-factor.现在用的是santa cruz 的A/G beads.抗体孵育8h, beads孵育5h,洗八次共1h.基因的表达没有问题，蛋白表达量绝对够。之前在293T里做的效果很好。但是在胚胎干细胞里面做的效果就差啦

我现在做的都是用lysis体系 ，如下：

50 mM Tris-Cl  pH=7.4
150 mM NaCl            
1 mM EDTA  
10% Glycerol            
1% triton X-100      


  

上图是在胚胎干细胞里面做的ip，然后银染的结果，背景比较深，而且看不到ip下来的多余的band。

除开用高盐洗脱之外，还能有什么方法去除非特异性的背景吗？请教各位你们用的什么lysis 、binding、 washing buffer 配方啊？整个的实验流程是怎样的？谢谢啦
如能解决我的问题的还有追加金币•••

[ Last edited by hwamg on 2012-7-16 at 10:41 ]
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1楼 2012-07-16 10:39:59
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hwamg

银虫 (正式写手)
怎么没人回帖呢？
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2楼2012-07-19 23:03:33
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hwamg

银虫 (正式写手)
斑竹，申请关闭，诺诺的问一句能返还金币不？好伤心，没有回复···
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3楼2012-12-06 22:06:37
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