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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，RNA提取方法
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c19345174

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左右充分裂解后10000转左右离心10min。取上清。
3、上清加入氯仿或氯仿：异戊醇等蛋白变性剂，量为每mlTRIZOL加入200ul氯仿。震荡摇匀30S后10000转离心10min。取上清层，切勿吸到中间层。
4、重复步骤3若干次至中间层几乎没有（次数越多，相对而言对tRNA影响越大，如纯度、浓度）
5、上清加入异丙醇（1:1）沉淀2h。离心留沉淀。即为tRNA！DEPC水溶测浓度及纯度。大体积乙醇或异丙醇封好后液氮保存1个月以上没有问题。
说明：根据不同组织RNA差异提取差异不同，对于多糖、多酚及蛋白的去除在相应步骤中加入相应试剂！
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11楼2012-07-16 20:05:12
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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00
⑴ 称取一定量的植物组织放入研磨中，液氮研磨成粉，加入适量的异硫氰酸胍提取缓冲液(w/v约为1:10)，充分研磨。
⑵ 将研磨液转入EP管中，加入十分之一体积2 mol/L的醋酸钠溶液(pH = 4.8)，混匀后加入等体积的氯仿(氯仿可适量减少)，盖紧EP管后剧烈摇动5 min，再冰上静止5 min，4 ℃离心15 min(12000 r/min)。
⑶ 离心后取上清至新的EP管中，加入等体积的氯仿重复抽提一次。如果中间有蛋白层，继续抽提直至无蛋白层为止。
⑷ 取上清，加入1/3体积的 5mol/L的醋酸钾溶液，混匀后冰浴15 min，4℃离心15min(12000 r/min)。
⑸ 取上清，加入等体积的异丙醇和十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液(－20 ℃冻存)，缓慢摇匀后在－20 ℃冰箱中沉淀30 min，4℃ 离心15min(12000 r/min)，使RNA沉淀在管壁。
⑹ RNA沉淀用75%的酒精清洗两次后风干，用适量的DEPC水溶解。凝胶电泳检测其完整性。(1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压：110 V出孔，90 V跑胶)
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12楼2012-07-16 23:54:29
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peijiawai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by c19345174 at 2012-07-16 20:05:12
准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左 ...

谢谢啊
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13楼2012-07-18 16:48:37
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sz123321

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by hpzinc65 at 2012-07-15 19:01:30
我们提植物的RNA都是用trizol，如果是降解的话你应该多注意细节，RNA酶在外界环境中很多，RNA确实比DNA容易降解多了。实在还提不出来可以试试CTAB，我以前也用过，或直接买试剂盒，比较节省时间

用trizol提取 总是有DNA污染 如何解决呀
求助，RNA提取方法
RNAdell 2014-11-14 11 时 10 分.jpg
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14楼2014-11-15 22:20:57
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