应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，RNA提取方法
142/2返回列表上一页12
查看: 1908  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

c19345174

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左右充分裂解后10000转左右离心10min。取上清。
3、上清加入氯仿或氯仿：异戊醇等蛋白变性剂，量为每mlTRIZOL加入200ul氯仿。震荡摇匀30S后10000转离心10min。取上清层，切勿吸到中间层。
4、重复步骤3若干次至中间层几乎没有（次数越多，相对而言对tRNA影响越大，如纯度、浓度）
5、上清加入异丙醇（1:1）沉淀2h。离心留沉淀。即为tRNA！DEPC水溶测浓度及纯度。大体积乙醇或异丙醇封好后液氮保存1个月以上没有问题。
说明：根据不同组织RNA差异提取差异不同，对于多糖、多酚及蛋白的去除在相应步骤中加入相应试剂！
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-16 20:05:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00
⑴ 称取一定量的植物组织放入研磨中，液氮研磨成粉，加入适量的异硫氰酸胍提取缓冲液(w/v约为1:10)，充分研磨。
⑵ 将研磨液转入EP管中，加入十分之一体积2 mol/L的醋酸钠溶液(pH = 4.8)，混匀后加入等体积的氯仿(氯仿可适量减少)，盖紧EP管后剧烈摇动5 min，再冰上静止5 min，4 ℃离心15 min(12000 r/min)。
⑶ 离心后取上清至新的EP管中，加入等体积的氯仿重复抽提一次。如果中间有蛋白层，继续抽提直至无蛋白层为止。
⑷ 取上清，加入1/3体积的 5mol/L的醋酸钾溶液，混匀后冰浴15 min，4℃离心15min(12000 r/min)。
⑸ 取上清，加入等体积的异丙醇和十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液(－20 ℃冻存)，缓慢摇匀后在－20 ℃冰箱中沉淀30 min，4℃ 离心15min(12000 r/min)，使RNA沉淀在管壁。
⑹ RNA沉淀用75%的酒精清洗两次后风干，用适量的DEPC水溶解。凝胶电泳检测其完整性。(1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压：110 V出孔，90 V跑胶)
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-16 23:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peijiawai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by c19345174 at 2012-07-16 20:05:12
准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左 ...

谢谢啊
回复此楼
13楼2012-07-18 16:48:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sz123321

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by hpzinc65 at 2012-07-15 19:01:30
我们提植物的RNA都是用trizol，如果是降解的话你应该多注意细节，RNA酶在外界环境中很多，RNA确实比DNA容易降解多了。实在还提不出来可以试试CTAB，我以前也用过，或直接买试剂盒，比较节省时间

用trizol提取 总是有DNA污染 如何解决呀
求助，RNA提取方法
RNAdell 2014-11-14 11 时 10 分.jpg
赞一下 回复此楼
14楼2014-11-15 22:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 peijiawai 的主题更新
142/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +14 积极向上； 2026-04-10 16/800 2026-04-12 20:02 by gruyclewee
[考研] 2本，初试303，0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 0854调剂 +12 长弓傲 2026-04-09 13/650 2026-04-12 09:56 by 逆水乘风
[考研] 305求调剂 +6 77Qi 2026-04-07 6/300 2026-04-12 02:30 by 秋豆菜芽
[考研] 药学305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-10 8/400 2026-04-12 00:07 by zhouwenxian
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 一志愿京区985，085401，与本科专业一致，电子信息工程， +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 青岛科技大学材料学院，环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 生物学调剂，一志愿西南大学348，Top期刊一区二作、二区三作，三等奖学金三次 +4 candyyyi 2026-04-09 4/200 2026-04-09 18:39 by l_paradox
[考研] 材料调剂 +10 18815505510 2026-04-09 11/550 2026-04-09 17:07 by 544594351
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂，接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +4 在线求有学上 2026-04-07 4/200 2026-04-07 19:47 by biomichael
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭