应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，RNA提取方法
142/2返回列表上一页12
查看: 2169  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

c19345174

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左右充分裂解后10000转左右离心10min。取上清。
3、上清加入氯仿或氯仿：异戊醇等蛋白变性剂，量为每mlTRIZOL加入200ul氯仿。震荡摇匀30S后10000转离心10min。取上清层，切勿吸到中间层。
4、重复步骤3若干次至中间层几乎没有（次数越多，相对而言对tRNA影响越大，如纯度、浓度）
5、上清加入异丙醇（1:1）沉淀2h。离心留沉淀。即为tRNA！DEPC水溶测浓度及纯度。大体积乙醇或异丙醇封好后液氮保存1个月以上没有问题。
说明：根据不同组织RNA差异提取差异不同，对于多糖、多酚及蛋白的去除在相应步骤中加入相应试剂！
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-16 20:05:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00
⑴ 称取一定量的植物组织放入研磨中，液氮研磨成粉，加入适量的异硫氰酸胍提取缓冲液(w/v约为1:10)，充分研磨。
⑵ 将研磨液转入EP管中，加入十分之一体积2 mol/L的醋酸钠溶液(pH = 4.8)，混匀后加入等体积的氯仿(氯仿可适量减少)，盖紧EP管后剧烈摇动5 min，再冰上静止5 min，4 ℃离心15 min(12000 r/min)。
⑶ 离心后取上清至新的EP管中，加入等体积的氯仿重复抽提一次。如果中间有蛋白层，继续抽提直至无蛋白层为止。
⑷ 取上清，加入1/3体积的 5mol/L的醋酸钾溶液，混匀后冰浴15 min，4℃离心15min(12000 r/min)。
⑸ 取上清，加入等体积的异丙醇和十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液(－20 ℃冻存)，缓慢摇匀后在－20 ℃冰箱中沉淀30 min，4℃ 离心15min(12000 r/min)，使RNA沉淀在管壁。
⑹ RNA沉淀用75%的酒精清洗两次后风干，用适量的DEPC水溶解。凝胶电泳检测其完整性。(1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压：110 V出孔，90 V跑胶)
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-16 23:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peijiawai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by c19345174 at 2012-07-16 20:05:12
准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左 ...

谢谢啊
回复此楼
13楼2012-07-18 16:48:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sz123321

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by hpzinc65 at 2012-07-15 19:01:30
我们提植物的RNA都是用trizol，如果是降解的话你应该多注意细节，RNA酶在外界环境中很多，RNA确实比DNA容易降解多了。实在还提不出来可以试试CTAB，我以前也用过，或直接买试剂盒，比较节省时间

用trizol提取 总是有DNA污染 如何解决呀
求助，RNA提取方法
RNAdell 2014-11-14 11 时 10 分.jpg
赞一下 回复此楼
14楼2014-11-15 22:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 peijiawai 的主题更新
142/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭