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矮牵牛总RNA叶片的提取方法，谁有，可以介绍一下吗？ 电泳的时候用非变性胶。 总是提不出来，我用的是传统的trizal方法 [ Last edited by peijiawai on 2012-7-14 at 06:48 ] |
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淘气维尼89
木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00
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⑴ 称取一定量的植物组织放入研磨中，液氮研磨成粉，加入适量的异硫氰酸胍提取缓冲液(w/v约为1:10)，充分研磨。 ⑵ 将研磨液转入EP管中，加入十分之一体积2 mol/L的醋酸钠溶液(pH = 4.8)，混匀后加入等体积的氯仿(氯仿可适量减少)，盖紧EP管后剧烈摇动5 min，再冰上静止5 min，4 ℃离心15 min(12000 r/min)。 ⑶ 离心后取上清至新的EP管中，加入等体积的氯仿重复抽提一次。如果中间有蛋白层，继续抽提直至无蛋白层为止。 ⑷ 取上清，加入1/3体积的 5mol/L的醋酸钾溶液，混匀后冰浴15 min，4℃离心15min(12000 r/min)。 ⑸ 取上清，加入等体积的异丙醇和十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液(－20 ℃冻存)，缓慢摇匀后在－20 ℃冰箱中沉淀30 min，4℃ 离心15min(12000 r/min)，使RNA沉淀在管壁。 ⑹ RNA沉淀用75%的酒精清洗两次后风干，用适量的DEPC水溶解。凝胶电泳检测其完整性。(1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压：110 V出孔，90 V跑胶) |
12楼2012-07-16 23:54:29
sesame_oil
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2楼2012-07-14 23:12:03
zhuhaoyong30649
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