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peijiawai

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,RNA提取方法 已有1人参与

矮牵牛总RNA叶片的提取方法,谁有,可以介绍一下吗?
电泳的时候用非变性胶。
总是提不出来,我用的是传统的trizal方法

[ Last edited by peijiawai on 2012-7-14 at 06:48 ]
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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00
⑴ 称取一定量的植物组织放入研磨中,液氮研磨成粉,加入适量的异硫氰酸胍提取缓冲液(w/v约为1:10),充分研磨。
⑵ 将研磨液转入EP管中,加入十分之一体积2 mol/L的醋酸钠溶液(pH = 4.8),混匀后加入等体积的氯仿(氯仿可适量减少),盖紧EP管后剧烈摇动5 min,再冰上静止5 min,4 ℃离心15 min(12000 r/min)。
⑶ 离心后取上清至新的EP管中,加入等体积的氯仿重复抽提一次。如果中间有蛋白层,继续抽提直至无蛋白层为止。
⑷ 取上清,加入1/3体积的 5mol/L的醋酸钾溶液,混匀后冰浴15 min,4℃离心15min(12000 r/min)。
⑸ 取上清,加入等体积的异丙醇和十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液(-20 ℃冻存),缓慢摇匀后在-20 ℃冰箱中沉淀30 min,4℃ 离心15min(12000 r/min),使RNA沉淀在管壁。
⑹ RNA沉淀用75%的酒精清洗两次后风干,用适量的DEPC水溶解。凝胶电泳检测其完整性。(1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测,电压:110 V出孔,90 V跑胶)
12楼2012-07-16 23:54:29
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sesame_oil

荣誉版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是哥不笑,一笑粉就掉
2楼2012-07-14 23:12:03
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zhuhaoyong30649

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TRIzol法,样品要研磨充分,不要贪多!其他的都知道的了!祝你成功!
3楼2012-07-15 07:56:51
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peijiawai

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuhaoyong30649 at 2012-07-15 07:56:51
TRIzol法,样品要研磨充分,不要贪多!其他的都知道的了!祝你成功!

谢谢,但是提了一共8次,全部都是降解的,没有可用的RNA
4楼2012-07-15 08:55:34
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