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peijiawai

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助，RNA提取方法已有1人参与

矮牵牛总RNA叶片的提取方法，谁有，可以介绍一下吗？
电泳的时候用非变性胶。
总是提不出来，我用的是传统的trizal方法

[ Last edited by peijiawai on 2012-7-14 at 06:48 ]

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1楼 2012-07-14 06:46:26

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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

应助: 9 (幼儿园)
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专业: 抗体工程学

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-07-19 09:16:00

⑴ 称取一定量的植物组织放入研磨中，液氮研磨成粉，加入适量的异硫氰酸胍提取缓冲液(w/v约为1:10)，充分研磨。
⑵ 将研磨液转入EP管中，加入十分之一体积2 mol/L的醋酸钠溶液(pH = 4.8)，混匀后加入等体积的氯仿(氯仿可适量减少)，盖紧EP管后剧烈摇动5 min，再冰上静止5 min，4 ℃离心15 min(12000 r/min)。
⑶ 离心后取上清至新的EP管中，加入等体积的氯仿重复抽提一次。如果中间有蛋白层，继续抽提直至无蛋白层为止。
⑷ 取上清，加入1/3体积的 5mol/L的醋酸钾溶液，混匀后冰浴15 min，4℃离心15min(12000 r/min)。
⑸ 取上清，加入等体积的异丙醇和十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液(－20 ℃冻存)，缓慢摇匀后在－20 ℃冰箱中沉淀30 min，4℃ 离心15min(12000 r/min)，使RNA沉淀在管壁。
⑹ RNA沉淀用75%的酒精清洗两次后风干，用适量的DEPC水溶解。凝胶电泳检测其完整性。(1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压：110 V出孔，90 V跑胶)