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peijiawai

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

[求助] 求助，RNA提取方法已有1人参与

矮牵牛总RNA叶片的提取方法，谁有，可以介绍一下吗？
电泳的时候用非变性胶。
总是提不出来，我用的是传统的trizal方法

[ Last edited by peijiawai on 2012-7-14 at 06:48 ]

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有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福已经有10人回复

1楼 2012-07-14 06:46:26

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c19345174

银虫 (初入文坛)

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专业: 中药学其他科学问题

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

准备工作：去RNA酶的研钵、枪头、EP管！
步骤：
1、取待提取组织，快速称重，放入加有液氮的研钵中，充分研磨。
2、液氮挥干后根据组织重量加入TRIZOL（1ml/500mg），融化后分装至去RNA酶EP管中，震荡摇匀2min左右充分裂解后10000转左右离心10min。取上清。
3、上清加入氯仿或氯仿：异戊醇等蛋白变性剂，量为每mlTRIZOL加入200ul氯仿。震荡摇匀30S后10000转离心10min。取上清层，切勿吸到中间层。
4、重复步骤3若干次至中间层几乎没有（次数越多，相对而言对tRNA影响越大，如纯度、浓度）
5、上清加入异丙醇（1:1）沉淀2h。离心留沉淀。即为tRNA！DEPC水溶测浓度及纯度。大体积乙醇或异丙醇封好后液氮保存1个月以上没有问题。
说明：根据不同组织RNA差异提取差异不同，对于多糖、多酚及蛋白的去除在相应步骤中加入相应试剂！