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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌基因组的部分酶切
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-28 20:07:43
pUCM-T是T载体吗？你确定它能用于构建文库？它的插入片段范围是多大？

是T载体，载体自连后就可以构建文库了，具体范围不清楚，觉得最大插入片段在7kb左右
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11楼2012-09-29 08:36:15
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那你要把主带切碎，形成拖尾，再切下目的大小的部分回收。做下预实验，确定要使用的酶的浓度以及酶切时间。
图里面marker是λ-Hind III，从上往下数第一条带是23kb，第二条是9.4kb，第三条是6.5kb。
3(4).bmp(162.15KB)
http://kuai.xunlei.com/d/GHLOTTNWMIFR?p=130497
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12楼2012-09-29 09:45:31
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hippo_li

金虫 (小有名气)
不好意思，不会贴图，上传成附件了。
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13楼2012-09-29 09:47:54
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Sau3A Ⅰ这个酶酶切的速率还是很快的，我一般做10ul的话就直接切3min左右就可以了，一般是可以看到几条主带的，你可以根据自己的基因组的情况做一下时间梯度，我觉得你做基因组文库的话，为什么不用cosmid或是fosmid的试剂盒呢，这个的话基因的片段在30-50kb的时候都是可以直接连接在载体上的。一般的DNA提取的结果差不多都是在这个片段的哦，除非你用的方法或是盒子非常好才可以得到100kb左右的片段。
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
14楼2012-09-29 14:33:55
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

完全酶切会切得很碎...
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15楼2012-09-29 15:21:21
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-29 09:45:31
那你要把主带切碎，形成拖尾，再切下目的大小的部分回收。做下预实验，确定要使用的酶的浓度以及酶切时间。
图里面marker是λ-Hind III，从上往下数第一条带是23kb，第二条是9.4kb，第三条是6.5kb。
3(4).bmp(162 ...

你们的λ-Hind III在使用前是需要在60℃处理5min吗？我的maker总跑不开，你们琼脂糖的浓度是多少啊？
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nothing isimpossible
16楼2012-11-14 12:19:32
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 12:19:32
你们的λ-Hind III在使用前是需要在60℃处理5min吗？我的maker总跑不开，你们琼脂糖的浓度是多少啊？...

λ-Hind III不需要处理，琼脂糖浓度0.7%左右，时间跑长一点。
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17楼2012-11-14 13:06:08
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