应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌基因组的部分酶切
172/2返回列表上一页12
查看: 3403  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-28 20:07:43
pUCM-T是T载体吗？你确定它能用于构建文库？它的插入片段范围是多大？

是T载体，载体自连后就可以构建文库了，具体范围不清楚，觉得最大插入片段在7kb左右
赞一下 回复此楼
11楼2012-09-29 08:36:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那你要把主带切碎，形成拖尾，再切下目的大小的部分回收。做下预实验，确定要使用的酶的浓度以及酶切时间。
图里面marker是λ-Hind III，从上往下数第一条带是23kb，第二条是9.4kb，第三条是6.5kb。
3(4).bmp(162.15KB)
http://kuai.xunlei.com/d/GHLOTTNWMIFR?p=130497
赞一下 回复此楼
12楼2012-09-29 09:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hippo_li

金虫 (小有名气)
不好意思，不会贴图，上传成附件了。
赞一下 回复此楼
13楼2012-09-29 09:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Sau3A Ⅰ这个酶酶切的速率还是很快的，我一般做10ul的话就直接切3min左右就可以了，一般是可以看到几条主带的，你可以根据自己的基因组的情况做一下时间梯度，我觉得你做基因组文库的话，为什么不用cosmid或是fosmid的试剂盒呢，这个的话基因的片段在30-50kb的时候都是可以直接连接在载体上的。一般的DNA提取的结果差不多都是在这个片段的哦，除非你用的方法或是盒子非常好才可以得到100kb左右的片段。
赞一下 回复此楼
宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
14楼2012-09-29 14:33:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

完全酶切会切得很碎...
赞一下 回复此楼
15楼2012-09-29 15:21:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-29 09:45:31
那你要把主带切碎，形成拖尾，再切下目的大小的部分回收。做下预实验，确定要使用的酶的浓度以及酶切时间。
图里面marker是λ-Hind III，从上往下数第一条带是23kb，第二条是9.4kb，第三条是6.5kb。
3(4).bmp(162 ...

你们的λ-Hind III在使用前是需要在60℃处理5min吗？我的maker总跑不开，你们琼脂糖的浓度是多少啊？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
16楼2012-11-14 12:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 12:19:32
你们的λ-Hind III在使用前是需要在60℃处理5min吗？我的maker总跑不开，你们琼脂糖的浓度是多少啊？...

λ-Hind III不需要处理，琼脂糖浓度0.7%左右，时间跑长一点。
赞一下 回复此楼
17楼2012-11-14 13:06:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tzaixmc 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:26 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭