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tzaixmc

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-28 20:07:43
pUCM-T是T载体吗?你确定它能用于构建文库?它的插入片段范围是多大?

是T载体,载体自连后就可以构建文库了,具体范围不清楚,觉得最大插入片段在7kb左右
11楼2012-09-29 08:36:15
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那你要把主带切碎,形成拖尾,再切下目的大小的部分回收。做下预实验,确定要使用的酶的浓度以及酶切时间。
图里面marker是λ-Hind III,从上往下数第一条带是23kb,第二条是9.4kb,第三条是6.5kb。
3(4).bmp(162.15KB)
http://kuai.xunlei.com/d/GHLOTTNWMIFR?p=130497
12楼2012-09-29 09:45:31
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hippo_li

金虫 (小有名气)

不好意思,不会贴图,上传成附件了。
13楼2012-09-29 09:47:54
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Sau3A Ⅰ这个酶酶切的速率还是很快的,我一般做10ul的话就直接切3min左右就可以了,一般是可以看到几条主带的,你可以根据自己的基因组的情况做一下时间梯度,我觉得你做基因组文库的话,为什么不用cosmid或是fosmid的试剂盒呢,这个的话基因的片段在30-50kb的时候都是可以直接连接在载体上的。一般的DNA提取的结果差不多都是在这个片段的哦,除非你用的方法或是盒子非常好才可以得到100kb左右的片段。
宠辱不惊,看庭前花开花落;去留无意,望天上云卷云舒。
14楼2012-09-29 14:33:55
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

完全酶切会切得很碎...
15楼2012-09-29 15:21:21
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by hippo_li at 2012-09-29 09:45:31
那你要把主带切碎,形成拖尾,再切下目的大小的部分回收。做下预实验,确定要使用的酶的浓度以及酶切时间。
图里面marker是λ-Hind III,从上往下数第一条带是23kb,第二条是9.4kb,第三条是6.5kb。
3(4).bmp(162 ...

你们的λ-Hind III在使用前是需要在60℃处理5min吗?我的maker总跑不开,你们琼脂糖的浓度是多少啊?
nothing isimpossible
16楼2012-11-14 12:19:32
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 12:19:32
你们的λ-Hind III在使用前是需要在60℃处理5min吗?我的maker总跑不开,你们琼脂糖的浓度是多少啊?...

λ-Hind III不需要处理,琼脂糖浓度0.7%左右,时间跑长一点。
17楼2012-11-14 13:06:08
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