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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 293T细胞转基因的问题
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保护你的大树

新虫 (小有名气)

[求助] 293T细胞转基因的问题

最近我利用293T细胞转了个基因，但是在看荧光的时候发现只有胞质有表达，而且呈现零星状的，想问问哪位高手能帮我解释下这是怎么回事，谢谢哈

空载体荧光



空载体常光



目的基因荧光



目的基因常光
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1楼 2012-07-07 08:45:34
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保护你的大树

新虫 (小有名气)
金币不多，麻烦大家见谅哈，谢谢哈。
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2楼2012-07-07 08:47:09
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sunyi123

银虫 (小有名气)
我也做过293T的没发现这种情况，无能为力啊。
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3楼2012-07-07 16:48:36
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119xu119

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这可能和你的目的基因表达后的胞内分布有关， 这个基因是和GFP融合还是IRES？
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4楼2012-07-07 20:44:56
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countingcrow

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看这样子 空载体应该是IRES-GFP
当IRES连上目的基因后，应为GFP在后面，目的基因的插入会减弱GFP的表达。
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5楼2012-07-08 06:07:18
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保护你的大树

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by countingcrow at 2012-07-08 06:07:18
看这样子 空载体应该是IRES-GFP
当IRES连上目的基因后，应为GFP在后面，目的基因的插入会减弱GFP的表达。

对的，是在GFP的后面，是融合表达。
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6楼2012-07-09 21:26:39
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liuluscl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不对吧，既然是IRES-GFP 的话，你表达基因的CDS 是独立的，也就不会是融合表达了，我看楼主是做GFP 融合蛋白细胞定位的？
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7楼2012-07-10 14:57:57
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保护你的大树

新虫 (小有名气)
空载体是pEGFP-N1载体，是在真核细胞上表达的。我没有理解你说的GFP融合蛋白定位是什么意思，我这个也没有表达定位的，只是检测下构建的载体在细胞上是否能够正常表达，新手，很多不懂，见谅。
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8楼2012-07-14 16:35:49
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