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最近Western blot做不出结果，希望大家多多指教 目的蛋白大小20kD左右，跑SDS可以看到，转膜后也可以看到，但是ECL显色后没有条带，只有白的亮的一片，而且也不清楚这些亮的一片到底是化学发光还是其他什么东西，各位高手有没有遇到这种情况，希望能给些好的建议 |
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jacky1985310
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11楼2012-07-11 20:04:33
jacky1985310
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励交流经验 2012-07-06 13:48:17
jl860822: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 22:12:22
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不知道你所谓的转膜后也可以看到是什么意思？是通过CBB外其他染色看的吗？ 首先确认一下自己的ECL化学发光操作步骤是否正确。ECL混合后，膜孵育的时间是多久？因为ECL发光强度是一个峰值曲线，过早或过完曝光都不合适。曝光时间可以控制在5-30min之间（排除膜孵育的5min）。 然后请问你是否将光圈全开，曝光时间是多久？ 楼主应该是positive成像的吧？即背景是黑色，目的条带为白色。 如果是这样的话，全亮的区域可能有目标条带，可能是由于浓度过高或者曝光时间过久造成的。我就遇到过浓度过高的情况，一块白，而且ECL之后条带部位都有明显的棕黄烧焦的颜色。 |
2楼2012-07-06 12:17:04
3楼2012-07-09 10:57:10
4楼2012-07-09 11:03:37