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aghos

铁虫 (初入文坛)

[求助] 谁能帮忙看下,我的紫外结果出什么问题了

前几天测了几个紫外,样品是还原型谷胱甘肽溶解在PB缓冲液中,浓度40μg/ml。但是结果很不合适,感觉全是末端吸收,而且在200~214nm透过率直接为0%,减小浓度后作用也不大。
我怀疑与比色皿质量有关,
空白比色皿吸收http://good.gd/2122408.htm
谷胱甘肽 吸收 40μg/ml 和1μg/ml
http://good.gd/2122415.htm
谷胱甘肽 透过率 40μg/ml 和1μg/ml
http://good.gd/2122418.htm
求高人解答,是不是我的石英比色皿有问题
标准的谷胱甘肽检测貌似是在0.1mM NaOH中进行的,在214及230有两个峰,我也试过,结果与在PB缓冲液中没有区别。
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aghos: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-04 15:27:50
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助 2012-07-05 10:40:47
aghos: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 确实是空白扣的不合适。谢谢你的提醒 2012-07-05 11:24:51
空白扣除了没有?你用标样确认下你的样品有没有变化
2楼2012-07-04 10:10:44
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crity328

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aghos: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-07-04 15:27:41
1、试试高点的浓度
2、紫外是否经过自检都符合要求
故天将降大任于斯人也,必先苦其心志,劳其筋骨,饿其体肤,空乏其身,行拂乱其所为,所以动心忍性,曾益其所不能。
3楼2012-07-04 10:17:44
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aghos

铁虫 (初入文坛)

又换了几个样品试了下,发现同样的问题,扫了下基线发现扫不平,具体怎么解决还不知道。
上一张图,
甲醇为空白autozero,然后测定空白甲醇的吸收
自上而下 依次为150μg/ml 阿司匹林 75μg/ml  15μg/ml 溶剂均为甲醇 及空白甲醇吸收
http://good.gd/2123232.htm

以前都是扫500~600的,扫了几次都以为是样品处理的不好。样品浓度很小的时候峰型与上图基线基本重合,增大浓度后一些紫外吸收强的基团在300nm可以看得见吸收峰,300nm以下就会出现毛刺,透过率0%。

是不是仪器问题?导致200~300nm的数据不可用?
谢谢各位的解答
4楼2012-07-04 10:53:05
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crity328

至尊木虫 (著名写手)

我估计仪器有问题,试试换台仪器。
故天将降大任于斯人也,必先苦其心志,劳其筋骨,饿其体肤,空乏其身,行拂乱其所为,所以动心忍性,曾益其所不能。
5楼2012-07-04 16:35:00
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aghos

铁虫 (初入文坛)

谢谢诸位的解答,问题解决了。
原因是我自己的问题,对仪器不熟悉,导致在检测过程中空白扣除的不合适。
今天重新测了,把空白扣合适了之后,测得谱图很不错,样品浓度再将低点就能用了。
这是我今天测得三个样品,比以前好太多了。
看来以后结果不合适还是要先从自身找问题。。。仪器一般还是比较稳定的。

透过率



吸光度

6楼2012-07-05 10:36:51
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