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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取
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daidai77

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by nuoyaeva at 2012-07-02 14:48:13
1. 纯RNA，A260/A280的理想值是1.9-2.1.
2. 紫外吸收法测定含量时，260nm附近有杂乱的峰值，说明你提到的样本浓度不在你该方法的有效测定范围内，给的值没有参考意义。
3. 不明白你到底要干嘛...


: ...

我不干嘛。就是藻老板弄来测个RNA 浓度。但是完全一窍不通。有蛋白污染对我测定RNA浓度有影响不啊？260nm处附近有杂乱峰的意思是样本浓度太低了？
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11楼2012-07-02 17:49:30
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by daidai77 at 2012-07-02 17:49:30
我不干嘛。就是藻老板弄来测个RNA 浓度。但是完全一窍不通。有蛋白污染对我测定RNA浓度有影响不啊？260nm处附近有杂乱峰的意思是样本浓度太低了？...

前面几位说的挺清楚了。纯净的高质量RNA在260 nm处有吸收峰，这个吸收峰与浓度相关。你的样品260/280才1.6，说明RNA提取的不好，质量较差，同时260 nm处有杂乱峰（你是扫全波长发现有杂峰么？），说明样品中某种污染物在260 nm附近有吸收，会严重干扰你计算RNA含量。这种干扰与样品浓度无关，是提取的问题。最好重提，另外强烈建议你想办法跑个电泳，电泳结果才能真正说明RNA提取质量。不明白你老板要干嘛。。。
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12楼2012-07-02 23:09:18
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
260/280小于1.8，一般是由于存在蛋白污染，你可以下次提取时多做一步氯仿抽提，但抽提这个步骤很可能造成一部分RNA损失，所以最好加大初始提取量。
另外，可以检测260/230，有助于判断污染情况，这个比值一般应该在1以上，如果偏小，则可能是盐或者多糖之类的残留影响结果，需要用乙醇再清洗。
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13楼2012-07-02 23:22:27
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chan_6217911

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by daidai77 at 2012-07-01 21:37:28
我没得跑电泳的设备，我是边缘人士，是藻类，是用trizol试剂盒提取的。上述描述的那种情况导致我无法判断是否提出来了，求教！...

还是要跑电泳的！
我上次跑电泳三条带很完整清晰，测出来的260/280在1左右，但是后续的反转录并不受影响。
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14楼2012-07-04 15:27:33
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