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daidai77

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by nuoyaeva at 2012-07-02 14:48:13
1. 纯RNA,A260/A280的理想值是1.9-2.1.
2. 紫外吸收法测定含量时,260nm附近有杂乱的峰值,说明你提到的样本浓度不在你该方法的有效测定范围内,给的值没有参考意义。
3. 不明白你到底要干嘛...


: ...

我不干嘛。就是藻老板弄来测个RNA 浓度。但是完全一窍不通。有蛋白污染对我测定RNA浓度有影响不啊?260nm处附近有杂乱峰的意思是样本浓度太低了?
11楼2012-07-02 17:49:30
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
11楼: Originally posted by daidai77 at 2012-07-02 17:49:30
我不干嘛。就是藻老板弄来测个RNA 浓度。但是完全一窍不通。有蛋白污染对我测定RNA浓度有影响不啊?260nm处附近有杂乱峰的意思是样本浓度太低了?...

前面几位说的挺清楚了。纯净的高质量RNA在260 nm处有吸收峰,这个吸收峰与浓度相关。你的样品260/280才1.6,说明RNA提取的不好,质量较差,同时260 nm处有杂乱峰(你是扫全波长发现有杂峰么?),说明样品中某种污染物在260 nm附近有吸收,会严重干扰你计算RNA含量。这种干扰与样品浓度无关,是提取的问题。最好重提,另外强烈建议你想办法跑个电泳,电泳结果才能真正说明RNA提取质量。不明白你老板要干嘛。。。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
12楼2012-07-02 23:09:18
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

260/280小于1.8,一般是由于存在蛋白污染,你可以下次提取时多做一步氯仿抽提,但抽提这个步骤很可能造成一部分RNA损失,所以最好加大初始提取量。
另外,可以检测260/230,有助于判断污染情况,这个比值一般应该在1以上,如果偏小,则可能是盐或者多糖之类的残留影响结果,需要用乙醇再清洗。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
13楼2012-07-02 23:22:27
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chan_6217911

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by daidai77 at 2012-07-01 21:37:28
我没得跑电泳的设备,我是边缘人士,是藻类,是用trizol试剂盒提取的。上述描述的那种情况导致我无法判断是否提出来了,求教!...

还是要跑电泳的!
我上次跑电泳三条带很完整清晰,测出来的260/280在1左右,但是后续的反转录并不受影响。
14楼2012-07-04 15:27:33
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