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活性污泥中硝酸还原酶和亚硝酸还原酶测定方法 已有2人参与
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各位虫友： 小弟想测定一下反应器中的污泥的硝酸还原酶和亚硝酸还原酶的活性。采用的方法是EST上某篇文章中的方法。具体操作过程是： 1.酶提取 取2ml污泥，用0.01M的磷酸缓冲液（pH为7.4）冲洗3次，然后在20kHZ、4℃下超声破碎5min，破碎结束后再12000rpm、4℃下离心10min取上清液，即制得粗酶液。 2. 酶活性测定 在一干净的试管中加入适量磷酸缓冲液(pH7.4)，NaNO3或NaNO2、甲基紫精、Na2S2O4至2 mL，它们的最终浓度为0.01M、1mM、1mM、1mM、5mM。加入300uL步骤1制取的粗酶液。然后将试管温度维持在30℃下反应30min。测定亚硝酸盐的增加量来表示硝酸还原酶的活性(NR)，或者测定亚硝酸盐的减少量来表示亚硝酸还原酶的活性(NIR)。硝酸还原酶的活性用umol NO2--N/(min•mg蛋白质)表示，亚硝酸还原酶的活性用umol NO2--N/(min•mg蛋白质)。 我用这个方法反复取样测定了好多次了，即使水浴了5h，也不见有明显的硝酸盐或者亚硝酸盐的还原。这个到底是怎么回事。不知有高手可给小弟解惑。是体系不对麽？ 或者如果哪位大虾有比较好的测定方法，也可以给小弟推荐一下。发邮箱也行的，hbaocheng@163.com 真的是不胜感激啊，小弟最近为这事儿都急死了，一直就测不出来，实验受挫啊，老板又该说了。。。。 |
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完全没有。。。 没人关注啊，貌似。。。。 5楼2012-07-16 14:49:57
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我干杯你随意
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