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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 环境 » 交流探讨 » 活性污泥中硝酸还原酶和亚硝酸还原酶测定方法
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hbaocheng

新虫 (初入文坛)

[求助] 活性污泥中硝酸还原酶和亚硝酸还原酶测定方法 已有2人参与

各位虫友：
  小弟想测定一下反应器中的污泥的硝酸还原酶和亚硝酸还原酶的活性。采用的方法是EST上某篇文章中的方法。具体操作过程是：
1.酶提取
  取2ml污泥，用0.01M的磷酸缓冲液（pH为7.4）冲洗3次，然后在20kHZ、4℃下超声破碎5min，破碎结束后再12000rpm、4℃下离心10min取上清液，即制得粗酶液。
2. 酶活性测定
在一干净的试管中加入适量磷酸缓冲液(pH7.4)，NaNO3或NaNO2、甲基紫精、Na2S2O4至2 mL，它们的最终浓度为0.01M、1mM、1mM、1mM、5mM。加入300uL步骤1制取的粗酶液。然后将试管温度维持在30℃下反应30min。测定亚硝酸盐的增加量来表示硝酸还原酶的活性(NR)，或者测定亚硝酸盐的减少量来表示亚硝酸还原酶的活性(NIR)。硝酸还原酶的活性用umol NO2--N/(min•mg蛋白质)表示，亚硝酸还原酶的活性用umol NO2--N/(min•mg蛋白质)。
我用这个方法反复取样测定了好多次了，即使水浴了5h，也不见有明显的硝酸盐或者亚硝酸盐的还原。这个到底是怎么回事。不知有高手可给小弟解惑。是体系不对麽？ 或者如果哪位大虾有比较好的测定方法，也可以给小弟推荐一下。发邮箱也行的，hbaocheng@163.com   真的是不胜感激啊，小弟最近为这事儿都急死了，一直就测不出来，实验受挫啊，老板又该说了。。。。
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1楼 2012-06-27 21:26:27
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gl-222

银虫 (正式写手)
关注，帮顶！
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2楼2012-06-28 11:34:36
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hbaocheng

新虫 (初入文坛)
顶起来啊 各位。。
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3楼2012-06-30 14:18:12
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包包丫头

铜虫 (小有名气)
我也很想知道，LZ现在解决了么？
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一起实现梦想
4楼2012-07-16 10:24:31
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hbaocheng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 包包丫头 at 2012-07-16 10:24:31
我也很想知道，LZ现在解决了么？

完全没有。。。 没人关注啊，貌似。。。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-16 14:49:57
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yxx_sari

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

顶上。。。同求。。。
另外，楼主你这个怎么判断酶活的啊？
你测羟胺氧化酶的活性不？
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6楼2015-01-04 22:01:25
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我干杯你随意

木虫 (小有名气)
请问楼主有进展了吗
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7楼2015-04-23 18:49:53
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lv123321123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是因为你没有在厌氧环境下操作呀？我才开始想测酶活，才看到之前的老帖子，但愿不要被你嫌弃。。。
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8楼2015-11-23 16:22:34
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梦飞扬青春

新虫 (初入文坛)
楼主这个问题现在解决了吗？我也遇到了相同的问题，想交流下经验啊
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9楼2016-03-10 08:03:20
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小木丸子

铁虫 (初入文坛)
NaNO3或NaNO2是1mM还是10mM？
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10楼2017-07-06 20:26:35
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