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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌电镜实验
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myloverlr

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌电镜实验

如果做大肠杆菌的透射电镜实验，对于大肠杆菌样品有什么要求吗？比如说需要多大浓度的菌液（OD600）；过夜培养的菌，用的LB液体培养基，能直接测样吗？有没有这方面的资料，可否给我发一份。
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1楼 2012-06-27 10:42:12
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myloverlr

金虫 (小有名气)
补充：用负染色法，观察大肠杆菌的表面结构即可
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2楼2012-06-27 10:43:27
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aloon111

金虫 (正式写手)
网上有，固体培养比较好吧
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汇天下之贤
3楼2012-06-27 12:02:27
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myloverlr

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aloon111 at 2012-06-27 12:02:27
网上有，固体培养比较好吧

有没有比较权威的资料
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4楼2012-06-27 14:07:19
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-27 19:46:32
myloverlr: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-28 11:01:13
个人感觉液体培养比较好，在液体情况下菌体生长快，菌体形态比较正常，如果取对数期的菌体，菌体的形态会比较一致。LB培养基直接测样当然是可以的，但是效果不是太好。染不染色问题不大。
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5楼2012-06-27 16:27:56
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lark001

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做大肠杆菌的透射电镜实验，最好将样品离心（弃上清液、留沉淀细胞）、固定、脱水、包埋、切片、染色后再上电镜观察，这样可以保持细胞形貌，至于需要多大浓度的菌液（OD600），不同培养基不太一样，一般到对数生长期比较好；大肠杆菌没做过，用的LB液体培养基过夜培养的菌，应当达到对数生长期，按上面说的步骤测样是可以的。
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6楼2012-06-28 09:28:03
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myloverlr

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wjf008 at 2012-06-27 16:27:56
个人感觉液体培养比较好，在液体情况下菌体生长快，菌体形态比较正常，如果取对数期的菌体，菌体的形态会比较一致。LB培养基直接测样当然是可以的，但是效果不是太好。染不染色问题不大。

您所LB直接测样效果不好，那怎样处理样品才能使电镜效果最好的呢？
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7楼2012-06-28 11:02:14
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myloverlr

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lark001 at 2012-06-28 09:28:03
做大肠杆菌的透射电镜实验，最好将样品离心（弃上清液、留沉淀细胞）、固定、脱水、包埋、切片、染色后再上电镜观察，这样可以保持细胞形貌，至于需要多大浓度的菌液（OD600），不同培养基不太一样，一般到对数生长 ...

不做切片，只是用负染色简单的观察一下样品
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8楼2012-06-28 11:02:46
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wjf008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by myloverlr at 2012-06-28 11:02:46
不做切片，只是用负染色简单的观察一下样品...

如果不做切片那楼主用透射电镜还有意义么？扫描电镜轻轻松松只要3分钟。
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9楼2012-06-28 11:34:14
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alidong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lark001 at 2012-06-28 09:28:03
做大肠杆菌的透射电镜实验，最好将样品离心（弃上清液、留沉淀细胞）、固定、脱水、包埋、切片、染色后再上电镜观察，这样可以保持细胞形貌，至于需要多大浓度的菌液（OD600），不同培养基不太一样，一般到对数生长 ...

看到你的关于大肠杆菌的TEM实验想咨询下相关信息，我前几天做了相关的实验，但是在透射电镜下完全没看见大肠杆菌，我用的磷钨酸钠做的染色，但是没有调节磷钨酸的pH值，所以想请教下。不知能否留个联系方式呢？本人急需做，万分感谢！！！
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明日复明日；明日何其多；日日待明日；万事成蹉跎。
10楼2013-09-04 10:58:27
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