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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA电泳
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yqs129219

新虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳

1：求教RNA电泳上样问题：上样6ul，1ul的BUFFER，1ul的RNA，剩下的用dd水补足，这样可以吗？还有就是电泳，电压120V用2%的胶要跑好久，差不多1个小时才到2/3以上，不知道怎么回事。求教。
2：另外求教晾干RNA方法。
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2012-06-20 22:13:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

欢仔

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-21 10:21:13
上样的水我是用DEPC水的，我平常使用1-1.5%的胶，120V跑20-30分钟，其实没有必要非要等到跑到2/3吧，我们都是溴酚蓝前沿跑到胶的1/2就好，有的时候甚至不到1/2，其实我个人觉得3条带分开就好。至于液体，我们配胶每 ...

我每次上样 加2ul的RNA  4ul的loadingbuffer  没加过水  这样行不 你们的为什么要加水
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勇于尝试新鲜事物
9楼2012-06-29 01:34:31
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普通回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
补充下，我用的是TBE缓冲液
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2楼2012-06-20 22:17:23
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生物大虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助哦 2012-06-21 13:39:49
最好用DEPC水吧，用150V电压跑10分钟就够了，RNA跑的时间不宜太长，我一般晾干RNA的话先用10uL枪吸出一些液体，然后在超净工作台里酒精灯附近（不要太近）晾干2~3min。
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谋事在人成事在天
3楼2012-06-21 09:37:32
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baobao包包

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNA很容易降解，跑电泳时间不宜太长吧。还有每次跑RNA电泳应该更换缓冲液，你那时间太长可能是缓冲液太老了，建议更换
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4楼2012-06-21 09:42:54
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l_h_10

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 恩，欢迎积极交流经验哦 2012-06-21 13:40:57
上样的水我是用DEPC水的，我平常使用1-1.5%的胶，120V跑20-30分钟，其实没有必要非要等到跑到2/3吧，我们都是溴酚蓝前沿跑到胶的1/2就好，有的时候甚至不到1/2，其实我个人觉得3条带分开就好。至于液体，我们配胶每次都用新配的，跑胶的话，用3d之内的。
晾干RNA的方法，先把75%酒精倒出来，然后用10ul的枪头尽可能吸出来剩下的液体，然后放到台子的靠出口的地方，让风吹5-10min。
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5楼2012-06-21 10:21:13
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-21 13:41:09
点样根据NanoDrop的浓度，最好在100-300ng之间，根据孔大小适当调整。
另外，根据经验1.2-1.5%胶较好。电泳7-8V/cm，电泳20-30min。点DL2000 MARKER.
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伟大航线....
6楼2012-06-21 10:50:31
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vickie20

铜虫 (小有名气)
咦？为什么一定要上样5微升呢？求解……
我都直接1微升RNA跑的，不用DEPC水补哎，这样不行吗？
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7楼2012-06-23 09:19:59
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-25 13:49:23
1、跑胶：1微升RNA加大约0.5微升上样buffer即可，不需用水补齐。
2、胶浓度一般0.8%即可，TAE buffer就行。
3、RNA晾干方法：75%乙醇洗后，再用100%乙醇洗一次，倒掉乙醇，超净台很快就能晾干。
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
8楼2012-06-25 13:41:19
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l_h_10

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 欢仔 at 2012-06-29 01:34:31
我每次上样 加2ul的RNA  4ul的loadingbuffer  没加过水  这样行不 你们的为什么要加水...

是因为楼主的总体积是2ul，上样量太少，就建议他加灭过的DEPC水补够6ul，我自己上样的时候是5ulRNA+1ul5Xbuffer。
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10楼2012-06-29 13:31:11
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