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EbbE820

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[求助] 荧光仪测出的波长与液相上使用的波长不一致

本人做某物质A的高效液相-荧光检测，参考文献中物质A的最大激发和发射波长分别是273和414 nm，我用高效液相荧光检测时如参考文献所设置，得到的色谱峰与紫外对比有明显增强。但是我用LS-55扫描的结果是最大激发和发射波长在331和395nm，在273 nm和414 nm几乎没有峰值；在液相上设置激发波长为314，发射波长为414 nm时，得到的峰明显比273的小。请问这是为什么呢？还望高人指点。

由于刚接触LS-55荧光仪，也不知道是不是自己操作有问题，因为我用的流动相是甲醇和水，所以样品是用甲醇配的，用LS-55测光谱操作如下
1.固定发射波长414，扫描纯甲醇的激发谱，当做空白
2.待测样品扣除1，得到激发光谱，激发峰值在331 nm 但是在激发峰后出现一个倒峰，对比空白发现是在发射波长414nm处（1 空白在414nm处有个很大的峰）
3.固定激发波长331 nm，扫描纯甲醇的发射谱，当做空白
4. 待测光谱扣除3，得到发射光谱，峰值在395nm

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1楼 2012-06-12 14:23:46

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manengxuan

木虫 (小有名气)

木木

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
EbbE820: 金币+2, ★有帮助, 谢谢交流哦~ 2012-06-12 16:17:22

我也遇到过同样的问题

首先，文献值不可尽信，你还是自己做一遍比较好，做荧光时由于溶剂，浓度还有狭缝等仪器参数的设置不同，得到的结果就可能会不一样。

其次，我做的物质在其他条件均一样的情况下，以甲醇做溶剂比以水做溶剂的荧光强度明显要大，我认为是甲醇具有增强荧光的作用，有关于甲醇在这方面的文献

希望与楼主探讨

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2楼2012-06-12 15:19:53

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EbbE820

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引用回帖:

2楼: Originally posted by manengxuan at 2012-06-12 15:19:53
我也遇到过同样的问题

首先，文献值不可尽信，你还是自己做一遍比较好，做荧光时由于溶剂，浓度还有狭缝等仪器参数的设置不同，得到的结果就可能会不一样。

其次，我做的物质在其他条件均一样的情况下，以甲醇 ...

我自己做了，按照荧光仪的结果在液相上做得到的荧光峰高和峰面积比用参考文献中用的波长的结果要小啊，我很困惑。刚刚又试了下用流动相配的溶液扫描荧光光谱，得到的最大激发和发射波长跟用纯甲醇的差不多

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3楼2012-06-12 16:20:24

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