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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求原核表达诱导表达具体操作？？？
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草帽小子

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by roomofxw at 2012-06-04 13:20:06
pET32，如果你用NdeI插入的话，那就不会多编码，用其他的会多出一段TrxA标签，大约11kDa吧，具体请看pET32的图谱。
1×PBS就是磷酸缓冲液，2×SDS就是浓度两倍的SDS母液。
至于诱导表达的标准操作步骤，见分子克隆 ...

我选择的上游引物的酶切位点是BamH Ι，下游引物的酶切位点是Hind III，可以帮我看哈具体要多出多大的蛋白吗？我不是很看得懂那个载体图！
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海贼王，我当定了
11楼2012-06-04 17:13:04
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
草帽小子: 金币+25, ★★★很有帮助 2012-06-05 10:53:49
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-07 13:45:05
按照pET32图谱，你的蛋白前面会多出来TrxA tag+His tag+S tag以及thrombin和EK位点
MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLATSGSGHHHHHHSAGLVPRGSTAIGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTGGGSGDDDDKSPMGYRGS其中GS是BamHI GGATCC翻译的
分子量约为18kDa
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12楼2012-06-04 17:21:50
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)
多看文献，看看你们这类基因别人的表达条件，第二，看你蛋白的目的是要上清的蛋白吗？
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13楼2012-06-05 23:51:49
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草帽小子

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lanjb1013 at 2012-06-05 23:51:49
多看文献，看看你们这类基因别人的表达条件，第二，看你蛋白的目的是要上清的蛋白吗？

上清和沉淀里面是不是都应该有我的目的蛋白喃？如果我最初只是想看看有没有与目的片段编码的蛋白大小相同的带，是不是只用上清跑SDS-PAGE就可以了喃？
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海贼王，我当定了
14楼2012-06-06 16:33:26
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)
如果是只要沉淀里面的话，那要求就比较低了。就很容易做。
恩，是的，与空载体的做对照。
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15楼2012-06-06 22:50:14
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