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草帽小子

银虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by roomofxw at 2012-06-04 13:20:06
pET32，如果你用NdeI插入的话，那就不会多编码，用其他的会多出一段TrxA标签，大约11kDa吧，具体请看pET32的图谱。
1×PBS就是磷酸缓冲液，2×SDS就是浓度两倍的SDS母液。
至于诱导表达的标准操作步骤，见分子克隆 ...

我选择的上游引物的酶切位点是BamH Ι，下游引物的酶切位点是Hind III，可以帮我看哈具体要多出多大的蛋白吗？我不是很看得懂那个载体图！

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海贼王，我当定了

11楼2012-06-04 17:13:04

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roomofxw

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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草帽小子: 金币+25, ★★★很有帮助 2012-06-05 10:53:49
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-07 13:45:05

按照pET32图谱，你的蛋白前面会多出来TrxA tag+His tag+S tag以及thrombin和EK位点
MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLATSGSGHHHHHHSAGLVPRGSTAIGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTGGGSGDDDDKSPMGYRGS其中GS是BamHI GGATCC翻译的
分子量约为18kDa

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12楼2012-06-04 17:21:50

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