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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物继续扩增原来的片段效果会更好吗？
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霸_霸

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物继续扩增原来的片段效果会更好吗？ 已有13人参与

实际做出来怎么效果不怎么样啊
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1楼 2012-06-01 10:27:25
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peng~yu

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 股交流 2012-06-04 13:39:12
这种情况我在一篇文献上看到过~那篇文献上说他们做的结果是第二轮扩增的效率不是很好，但是我最近要用，我也做了一次，第一轮用常规PCR扩增的一轮，然后由于片段比较小（在300bp左右）然后我有用定量扩了一轮，但是定量的结果还是很好的，扩增曲线也相当的漂亮，所以我觉得可能是要是片段长度短的话应该就没问题，长的话还是尽量设计巢式或者半巢式的引物吧~
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14楼2012-06-04 10:10:50
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draco1987

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-04 13:38:46
你有没考虑过反应体系本身没优化造成扩增效率不高的情况？PCR产物做模板扩增效果不一定好很多，但是可以屏蔽原模板扩增产生的杂带，所以也不是一无是处。不过，想要2次重复扩增，一定要用保真度非常好的酶，不然扩增造成的碱基错配率会累积到一个很坑的水平。
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2楼2012-06-01 15:27:31
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霸_霸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by draco1987 at 2012-06-01 15:27:31
你有没考虑过反应体系本身没优化造成扩增效率不高的情况？PCR产物做模板扩增效果不一定好很多，但是可以屏蔽原模板扩增产生的杂带，所以也不是一无是处。不过，想要2次重复扩增，一定要用保真度非常好的酶，不然扩增 ...

有道理啊
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3楼2012-06-01 15:59:45
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江苏虞游

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做过几次，效果还是挺不错的
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4楼2012-06-02 13:23:50
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