24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1913  |  回复: 22

shuwolf

新虫 (小有名气)


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-09 13:37:12
1\纯化PCR产物
2、尽量保证每次电泳的胶的浓度梯度一致,
此两点很重要
人生就是修行
11楼2012-06-09 09:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 侯云hy at 2012-06-09 09:46:54
我之前也试过纯化和未纯化的比较,差别比较大,然后我导师就不让我纯化,可是不纯化泳道颜色好深啊。你有没有遇到这种情况啊?...

为什么不让你纯化啊,许多人都纯化的。涌到颜色深部知道,我用SYBR 染色。
12楼2012-06-09 20:10:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

侯云hy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by elbo at 2012-06-09 20:10:02
为什么不让你纯化啊,许多人都纯化的。涌到颜色深部知道,我用SYBR 染色。...

他说纯化有损失,让我尽量减少PCR和DGGE之间的步骤
13楼2012-06-10 10:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-11 13:54:45
引用回帖:
13楼: Originally posted by 侯云hy at 2012-06-10 10:16:18
他说纯化有损失,让我尽量减少PCR和DGGE之间的步骤...

如果你PCR产物浓度很高的话,纯化也丢失不了多少,小片段的PCR产物回收率还是很高的。肯定都在80%以上。如果PCR产物检测的时候,条带没有M亮,那么就是不纯化跑出来DGGE也不好。根本问题还是要DNA模版要纯,浓度高,1ul的PCR产物出来都很亮很亮。
14楼2012-06-10 13:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

侯云hy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by elbo at 2012-06-10 13:04:32
如果你PCR产物浓度很高的话,纯化也丢失不了多少,小片段的PCR产物回收率还是很高的。肯定都在80%以上。如果PCR产物检测的时候,条带没有M亮,那么就是不纯化跑出来DGGE也不好。根本问题还是要DNA模版要纯,浓度高 ...

您能否帮我看下,在我胶的上半部分,有条带,但是条带上下有弥散现象,我将条带和弥散的部分都割胶回收测序,发现这些都是同一条序列。是不是我的DGGE的电压有问题还是其他的问题啊?电压80v 12.5h,上样量20ul 谢谢啊?


15楼2012-06-10 21:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 侯云hy at 2012-06-09 09:45:16
我用的是TAKALA 的 EX Taq酶,这个酶可以吗?你用的是哪个啊?...

TAKARA的酶可以。
用到如果过于黑,尝试减少上样量试试吧。
16楼2012-06-11 08:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

同样的问题在我这里也发生了,初步怀疑是水污染了。
17楼2012-06-11 10:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

侯云hy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by xiadongliang at 2012-06-11 08:29:27
TAKARA的酶可以。
用到如果过于黑,尝试减少上样量试试吧。...

上样量15ul也还是颜色重。
18楼2012-06-11 10:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我现在上样才7uL PCR产物
19楼2012-06-12 08:13:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by elbo at 2012-06-10 13:04:32
如果你PCR产物浓度很高的话,纯化也丢失不了多少,小片段的PCR产物回收率还是很高的。肯定都在80%以上。如果PCR产物检测的时候,条带没有M亮,那么就是不纯化跑出来DGGE也不好。根本问题还是要DNA模版要纯,浓度高 ...

我的条带就很暗,能不能PCR产物电泳回收再跑一次PCR,增加点样DNA的量啊?这个方法你觉得可不可行?
20楼2012-07-01 11:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyujun123 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物与医药求调剂 +5 heguanhua 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:58 by Hdyxbekcb
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +10 大火山小火山 2026-04-05 10/500 2026-04-05 19:58 by 小蜗牛小蜗牛
[考研] 304求调剂(085602,过四级,一志愿985) +15 化工人999 2026-04-04 15/750 2026-04-05 16:25 by 我是电风扇r
[考研] 工科08专硕机械275求调剂 +3 AaAa7420 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:26 by jp9609
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北京2,材料与化工308求调剂 +10 熊二想上岸 2026-04-04 10/500 2026-04-05 05:20 by houyaoxu
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +39 洛神哥哥 2026-03-31 41/2050 2026-04-03 21:51 by qlm5820
[考研] 一志愿重庆大学085404,总分314分,求调剂 +4 zf83hn 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:25 by 啵啵啵0119
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 372分材料与化工(085600)一志愿湖南大学求调剂 +3 蓝笺片 2026-04-03 4/200 2026-04-03 17:58 by Jimmyandyou
[考研] 338求调剂 +4 zzz,,r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
[考研] 284求调剂 +12 小熊~~ 2026-03-31 12/600 2026-04-01 20:23 by 花??
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:02 by 逆水乘风
[考研] 吉大生物学326分求调剂 +3 sunnyupup 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:28 by longlotian
信息提示
请填处理意见