应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE做了两次，图片相差很大，还有空白对照也有条带。
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 2404  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shuwolf

新虫 (小有名气)
★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-09 13:37:12
1\纯化PCR产物
2、尽量保证每次电泳的胶的浓度梯度一致，
此两点很重要
赞一下 回复此楼
人生就是修行
11楼2012-06-09 09:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 侯云hy at 2012-06-09 09:46:54
我之前也试过纯化和未纯化的比较，差别比较大，然后我导师就不让我纯化，可是不纯化泳道颜色好深啊。你有没有遇到这种情况啊？...

为什么不让你纯化啊，许多人都纯化的。涌到颜色深部知道，我用SYBR 染色。
赞一下 回复此楼
12楼2012-06-09 20:10:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

侯云hy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by elbo at 2012-06-09 20:10:02
为什么不让你纯化啊，许多人都纯化的。涌到颜色深部知道，我用SYBR 染色。...

他说纯化有损失，让我尽量减少PCR和DGGE之间的步骤
赞一下 回复此楼
13楼2012-06-10 10:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-11 13:54:45
引用回帖:
13楼: Originally posted by 侯云hy at 2012-06-10 10:16:18
他说纯化有损失，让我尽量减少PCR和DGGE之间的步骤...

如果你PCR产物浓度很高的话，纯化也丢失不了多少，小片段的PCR产物回收率还是很高的。肯定都在80%以上。如果PCR产物检测的时候，条带没有M亮，那么就是不纯化跑出来DGGE也不好。根本问题还是要DNA模版要纯，浓度高，1ul的PCR产物出来都很亮很亮。
赞一下 回复此楼
14楼2012-06-10 13:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

侯云hy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by elbo at 2012-06-10 13:04:32
如果你PCR产物浓度很高的话，纯化也丢失不了多少，小片段的PCR产物回收率还是很高的。肯定都在80%以上。如果PCR产物检测的时候，条带没有M亮，那么就是不纯化跑出来DGGE也不好。根本问题还是要DNA模版要纯，浓度高 ...

您能否帮我看下，在我胶的上半部分，有条带，但是条带上下有弥散现象，我将条带和弥散的部分都割胶回收测序，发现这些都是同一条序列。是不是我的DGGE的电压有问题还是其他的问题啊？电压80v 12.5h，上样量20ul 谢谢啊？
赞一下 回复此楼
15楼2012-06-10 21:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 侯云hy at 2012-06-09 09:45:16
我用的是TAKALA 的 EX Taq酶，这个酶可以吗？你用的是哪个啊？...

TAKARA的酶可以。
用到如果过于黑，尝试减少上样量试试吧。
赞一下 回复此楼
16楼2012-06-11 08:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

同样的问题在我这里也发生了，初步怀疑是水污染了。
赞一下 回复此楼
17楼2012-06-11 10:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

侯云hy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by xiadongliang at 2012-06-11 08:29:27
TAKARA的酶可以。
用到如果过于黑，尝试减少上样量试试吧。...

上样量15ul也还是颜色重。
赞一下 回复此楼
18楼2012-06-11 10:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我现在上样才7uL PCR产物
赞一下 回复此楼
19楼2012-06-12 08:13:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by elbo at 2012-06-10 13:04:32
如果你PCR产物浓度很高的话，纯化也丢失不了多少，小片段的PCR产物回收率还是很高的。肯定都在80%以上。如果PCR产物检测的时候，条带没有M亮，那么就是不纯化跑出来DGGE也不好。根本问题还是要DNA模版要纯，浓度高 ...

我的条带就很暗，能不能PCR产物电泳回收再跑一次PCR，增加点样DNA的量啊？这个方法你觉得可不可行？
赞一下 回复此楼
20楼2012-07-01 11:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyujun123 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 3/150 2026-11-10 01:40 by FChKX8meu1ds
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭