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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教克隆中一个奇怪的问题
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 请教克隆中一个奇怪的问题 已有7人参与

本人用Transgene的pEASY-T1进行克隆。测序结果却和载体，和目的序列都比对不上，是怎么回事呢？
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Things change, people grow.
1楼 2012-05-28 16:37:31
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
很可能是反向测序，建议楼主将测序结果转换为反向互补序列再比对一下看看。
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3楼2012-05-29 08:29:14
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-28 20:31:09
几个问题,请先回答一下：
1 你的目的基因多长？
2 PCR产物跑胶的胶图能发上来看看么?
3 PCR产物直接送测序的，还是转化筛菌了？
4 测序结果有多长，峰图看过了么（也可以贴一下）？
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2楼2012-05-28 19:16:53
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chs4502

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看看你用的培养基有没有问题，也可能是测序的问题。。。
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4楼2012-05-29 09:58:39
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普通回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
污染了吧。。。不过08年的时候我也用过他家的这个产品，失望至极。。。
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5楼2012-05-30 10:53:26
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zqx128

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2006年前后我们用过他家的产品，挺好用的呀，难道现在的质量不行了？我觉得3楼说的有道理，楼主先试一下吧，毕竟这个是最简单的。祝好运~
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6楼2012-05-30 11:36:51
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703600973
7楼2012-05-30 14:29:51
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703600973
8楼2012-05-30 14:30:00
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-28 19:16:53
几个问题,请先回答一下：
1 你的目的基因多长？
2 PCR产物跑胶的胶图能发上来看看么?
3 PCR产物直接送测序的，还是转化筛菌了？
4 测序结果有多长，峰图看过了么（也可以贴一下）？

首先对你的热心表示感谢
目的基因约1100bp；
胶图在凝胶仪上没得拷过来；
转化筛菌后送测的；
测序结果900多；
此外，我又在我们基因组数据库里比对了一下，有》500bp能比上，但不是我的目的基因，可能是扩错基因了吧？
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Things change, people grow.
9楼2012-05-30 22:28:05
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2012-05-29 08:29:14
很可能是反向测序，建议楼主将测序结果转换为反向互补序列再比对一下看看。

这个应该不会，用BLAST比对的。
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Things change, people grow.
10楼2012-05-30 22:28:34
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