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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 请教克隆中一个奇怪的问题 已有7人参与

本人用Transgene的pEASY-T1进行克隆。测序结果却和载体,和目的序列都比对不上,是怎么回事呢?
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Things change, people grow.
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很可能是反向测序,建议楼主将测序结果转换为反向互补序列再比对一下看看。
3楼2012-05-29 08:29:14
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-28 20:31:09
几个问题,请先回答一下:
1 你的目的基因多长?
2 PCR产物跑胶的胶图能发上来看看么?
3 PCR产物直接送测序的,还是转化筛菌了?
4 测序结果有多长,峰图看过了么(也可以贴一下)?
2楼2012-05-28 19:16:53
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chs4502

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看看你用的培养基有没有问题,也可能是测序的问题。。。
4楼2012-05-29 09:58:39
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普通回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

污染了吧。。。不过08年的时候我也用过他家的这个产品,失望至极。。。
5楼2012-05-30 10:53:26
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zqx128

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2006年前后我们用过他家的产品,挺好用的呀,难道现在的质量不行了?我觉得3楼说的有道理,楼主先试一下吧,毕竟这个是最简单的。祝好运~
6楼2012-05-30 11:36:51
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7楼2012-05-30 14:29:51
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8楼2012-05-30 14:30:00
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-28 19:16:53
几个问题,请先回答一下:
1 你的目的基因多长?
2 PCR产物跑胶的胶图能发上来看看么?
3 PCR产物直接送测序的,还是转化筛菌了?
4 测序结果有多长,峰图看过了么(也可以贴一下)?

首先对你的热心表示感谢
目的基因约1100bp;
胶图在凝胶仪上没得拷过来;
转化筛菌后送测的;
测序结果900多;
此外,我又在我们基因组数据库里比对了一下,有》500bp能比上,但不是我的目的基因,可能是扩错基因了吧?
Things change, people grow.
9楼2012-05-30 22:28:05
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2012-05-29 08:29:14
很可能是反向测序,建议楼主将测序结果转换为反向互补序列再比对一下看看。

这个应该不会,用BLAST比对的。
Things change, people grow.
10楼2012-05-30 22:28:34
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